MPHOSPH8基因敲除慢病毒
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产品编号 L06256
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¥ 6999.00
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MPHOSPH8 Knockout Lentivirus(MPHOSPH8基因敲除慢病毒)是一种感染动物细胞后可以同时表达Cas9、目的基因sgRNA和puromycin抗性基因的慢病毒。本产品用于在动物细胞中基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因,并且本慢病毒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。

本慢病毒基因序列的关键图谱信息请参考图1。本慢病毒可用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。

图1. 可同时表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的本慢病毒其基因序列的关键图谱信息。

用于包装本慢病毒的质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得,sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。

本慢病毒用于实验时,建议同时选购无任何靶向的对照慢病毒Control Knockout Lentivirus (L00015)或靶向GFP的对照慢病毒GFP Knockout Lentivirus (L00017)

碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的MPHOSPH8基因敲除的质粒(L06255 pLenti-MPHOSPH8-sgRNA)慢病毒(L06256 MPHOSPH8 Knockout Lentivirus)HEK293T细胞(L06257 MPHOSPH8 Knockout HEK293T Cells)HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L06258 MPHOSPH8 Knockout HEK293T RIPA Lysate)HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L06259 MPHOSPH8 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品,具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。

MPHOSPH8基因的基本信息如下:

Species Gene Symbol Gene ID GenBank Accession Transcript
Human MPHOSPH8 54737 BC003542 NM_017520

 

About the gene
Official Symbol MPHOSPH8
Previous Symbol -
Official Full Name M-phase phosphoprotein 8
Synonyms mpp8; HSMPP8
Location 13q12.11
Gene Type protein_coding
Uniprot ID Q99549
Pathway/Library Epigenetic Regulators Related Genes Library
Gene Summary Heterochromatin component that specifically recognizes and binds methylated 'Lys-9' of histone H3 (H3K9me) and promotes recruitment of proteins that mediate epigenetic repression (PubMed:20871592, PubMed:26022416). Mediates recruitment of the HUSH complex to H3K9me3 sites: the HUSH complex is recruited to genomic loci rich in H3K9me3 and is required to maintain transcriptional silencing by promoting recruitment of SETDB1, a histone methyltransferase that mediates further deposition of H3K9me3, as well as MORC2 (PubMed:26022416, PubMed:28581500). Binds H3K9me and promotes DNA methylation by recruiting DNMT3A to target CpG sites; these can be situated within the coding region of the gene (PubMed:20871592). Mediates down-regulation of CDH1 expression (PubMed:20871592). Also represses L1 retrotransposons in collaboration with MORC2 and, probably, SETDB1, the silencing is dependent of repressive epigenetic modifications, such as H3K9me3 mark. Silencing events often occur within introns of transcriptionally active genes, and lead to the down-regulation of host gene expression (PubMed:29211708). The HUSH complex is also involved in the silencing of unintegrated retroviral DNA by being recruited by ZNF638: some part of the retroviral DNA formed immediately after infection remains unintegrated in the host genome and is transcriptionally repressed (PubMed:30487602). MPP8_HUMAN,Q99549
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
L06256 MPHOSPH8 Knockout Lentivirus 108 TU
说明书 1份
保存条件:

-80℃保存,至少一年有效。

注意事项:

碧云天拥有sgRNA序列的知识产权,如果需要sgRNA序列,请在订购后发送邮件向info@beyotime.com索取。sgRNA序列信息与本慢病毒,未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。使用者在发表研究论文或结果时,应注明来源。

对于非目录产品的CRISPR基因敲除用的慢病毒的定制,可联系碧云天技术服务service@beyotime.com

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 慢病毒的感染:
a. 确定puromycin的筛选浓度:待感染的细胞按一定密度铺在12孔或24孔中,按照0、0.2、0.5、1、1.5、2、3、4、5µg/ml这样的浓度测试细胞对puromycin的敏感性,推荐使用碧云天的Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) (ST551)。两天后细胞全部死亡的最低浓度即为该细胞的puromycin筛选浓度,具体步骤参考碧云天该产品的使用说明:https://www.beyotime.com/product/ST551-10mg.htm
b. 慢病毒感染细胞:按实验需要将细胞铺板(如12孔板),细胞数以第2天密度约50%为宜。设置非感染细胞组、对照组和基因敲除组。37℃培养过夜后,培养液中加入5~10μg/ml的Polybrene (C0351/ST551)。病毒感染前,从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值加入适量病毒,对于未浓缩的病毒,可以直接按0.5ml/孔加入细胞,对于浓缩或测定滴度的病毒,一般100µl/孔或107 TU已经足够,轻轻摇匀,37℃继续培养。两天后,吸除含病毒的培养液,换为新鲜的含一定浓度的puromycin的培养液进行筛选,一般筛选2天后,非感染细胞组细胞逐渐死去,加入病毒组存活率比较高,就可以收集部分细胞检测目的蛋白的表达或进行其它实验。培养过程中,可以将细胞转至6孔板或10cm培养皿进行扩大培养。一周之后,puromycin浓度可减半。如果有必要后续可以通过将细胞稀释至2.5个/ml,然后按照每孔200µl接种到96孔板中(每孔平均0.5个细胞),筛选单克隆细胞株。病毒感染的方法可参考Polybrene (C0351)的使用说明:https://www.beyotime.com/product/C0351-1ml.htm
2. 基因编辑的鉴定:
a. 对于多克隆细胞,可以通过T7 Endonuclease I (T7EI)进行鉴定,即提取细胞的基因组DNA,在sgRNA序列两边设计引物进行PCR扩增,然后进行T7EI酶切,具体请参考碧云天的T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) (D7080)基因组编辑突变检测试剂盒(D0508);也可以通过相应的抗体进行检测。
b. 对于单克隆细胞,可通过PCR扩增出sgRNA靶向的基因片段后进行常规测序的方式进行验证,同时也可以使用相应的抗体进行检测。
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产品编号 产品名称 包装
L00015 Control Knockout Lentivirus 108 TU
L00017 GFP Knockout Lentivirus 108 TU
C0222 青霉素-链霉素溶液(100X) 100ml
C0351-1ml Polybrene (Hexadimethrine Bromide) 1ml
C0351-50mg Polybrene (Hexadimethrine Bromide) 50mg
D0508S/M 基因组编辑突变检测试剂盒 25/100次
D7080S/M/L T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) 250/1250/5000U
ST551-10mg Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) 10mg/ml×1ml
ST551-50mg Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) 10mg/ml×5ml
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ST1380-500mg Polybrene (≥94%, Reagent grade) 500mg
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