BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶(6%, 10孔)
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产品编号 GS305S
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¥ 1199.00
产品包装:
10块 10块 10块 10块
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碧云天的BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶(BeyoGel™ EMSA Precast PAGE Gel)是一种使用安全、便捷、高品质的常规尺寸聚丙烯酰胺预制凝胶,适用于EMSA (Electrophoretic mobility shift assay)实验。本预制胶有非常优良的分离效果,电泳后条带平整、清晰、细腻、锐利,几乎没有边缘效应;同时本预制胶胶板为玻璃材质,减少了对蛋白的非特异性吸附,电泳效果非常好,达到甚至超过了自配EMSA PAGE胶的电泳效果。

碧云天的BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶有10孔和15孔两种孔数,4%和6%两种不同浓度的固定浓度胶可供选择。如果有较大量的特殊浓度需求,碧云天可提供定制服务。每种预制胶的参数请参考下表:

产品编号 预制胶浓度 孔数 最大上样量 电泳
缓冲液体系
GS301/GS302 4% 10/15 60/30μl 0.5X TBE
GS305/GS306 6% 10/15 60/30μl 0.5X TBE

本预制胶丙烯酰胺(Acrylamide)与甲叉丙烯酰胺(Bisacrylamide)的比例为29:1,凝胶厚度为1.5mm。加样孔数为10孔的最大上样量为60μl,加样孔数为15孔的最大上样量为30μl。胶板尺寸:宽×高×厚度为98×84×4.1mm;凝胶尺寸:宽×高×厚度为81×74×1.5mm。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)技术广泛用于蛋白质、核酸及蛋白质-核酸复合物的分离纯化、检测、鉴定、分子量分析等实验,是生命科学研究中最基本的实验技术之一。常见的Western印迹(Western blot)检测就是基于PAGE的。

凝胶迁移实验(也称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验) (Electrophoretic mobility shift assay, EMSA),也称Gel Shift,是一种用于蛋白与核酸相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用于蛋白-DNA、蛋白-RNA相互作用研究。EMSA技术基于进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白质-DNA复合物的迁移速度比游离线性DNA片段慢,从而导致DNA迁移率在与蛋白质结合时减慢[1,2]。EMSA分辨蛋白质-DNA复合物的能力在很大程度上取决于复合物在实验步骤中的稳定性。电泳缓冲液相对较低的离子强度有助于稳定瞬时相互作用,可以通过该方法分析不稳定的复合物。此外,EMSA也可以解决某些蛋白质因子结合导致的DNA构象改变或弯曲。EMSA不局限于蛋白质与DNA的相互作用,也可用于蛋白质-RNA和蛋白质-蛋白质的相互作用的研究[3,4]。

EMSA作为研究基因调控和确定蛋白质-DNA相互作用的一项重要技术有如下优点。DNA结合蛋白的来源可以是细胞核或全细胞提取物、体外翻译产物或分离纯化的蛋白;可以定性地用于鉴定裂解物中的序列特异性DNA结合蛋白(如转录因子) [5],并结合相应DNA序列上的点突变来鉴定特定基因上游调控区内的重要结合序列;还可用于定量测量热力学和动力学参数。

碧云天的BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶使用略偏碱性pH的TBE缓冲液制备。

本预制胶使用常用的0.5X TBE电泳液,推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)TBE (5X premixed powder) (ST723)以及TBE (5X) (ST718),或参考使用说明自行配制相应的电泳液。

关于10孔和15孔预制胶的选择:需要检测的样品数量多或者需要定量时,推荐使用15孔预制胶,通量更大、更便于进行较多样品的定量统计分析;需要获得非常漂亮的代表性图片时,推荐使用10孔预制胶,10孔预制胶获得的条带更加平整和锐利。

本产品使用安全、便捷。本预制胶无需配制,即开即用,去掉梳子即可上样,而传统的EMSA PAGE配制凝胶繁琐费时,并且制胶时还会接触有毒和刺激性试剂。

本产品质量稳定。本预制胶采用高品质玻璃胶板,和塑料胶板相比,大大减少了胶板对蛋白的吸附,电泳效果更好。本产品流水线灌注,品质稳定可靠,重复性好,不同批次的产品一致性高。

本产品电泳效果好。本预制胶的蛋白质-核酸复合物分离效果极佳,非常适合低丰度蛋白的检测。

本产品电泳槽兼容性好。本预制胶兼容市场上主流的小型电泳槽,如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)、Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN® Tetra Cell电泳槽、Life公司的XCell SureLock® Mini-Cell电泳槽(需与碧云天可免费提供的特制挡板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini胶电泳槽或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽。

本产品电泳时间短。本预制胶最快30分钟即可完成电泳,推荐的电泳电压和电泳时间为100V 30-90分钟,即可完成电泳并获得非常平整和锐利的电泳条带。具体的电泳时间取决于凝胶浓度。

本产品取出凝胶极为便捷。只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可,并且玻璃胶板打开极为方便,无需特殊的起撬工具。

本预制胶属于特殊用途预制胶。碧云天的特殊用途预制胶的比较和选择可以参考碧云天的相关网页:

http://www.beyotime.com/support/special-precast-page-gel.htm

碧云天同时提供EMSA PAGE凝胶配制试剂盒(GS298)。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
GS305S BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶(6%, 10孔) 10块
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,1-2个月有效。切勿置于0℃以下冷冻。

注意事项:

由于本预制胶保质期较短,需新鲜制备,在您确认订购后约3-5个工作日才能发货。

本预制胶不能置于0℃以下冷冻,否则凝胶会冻裂。

电泳液建议新鲜配制。试剂纯度不够、反复使用或长期放置的缓冲液会降低电泳效果。电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。

本预制胶为了兼容几乎所有厂家的小型凝胶电泳槽,所以改进了与电泳槽U型硅橡胶密封条的吻合结构(如碧云天、Bio-Rad等公司的电泳槽)。建议在电泳时须将具有突起结构的U型硅橡胶密封条取出后反过来安装,使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液,见下图。一般内槽电泳液加满,外槽电泳液没过电泳槽底部的阳极即可,并且电泳结束后的电泳缓冲液可以作为外槽缓冲液重复使用1-2次。另外,部分公司都已经配套无突起结构的U型硅橡胶密封条,使用这样的U型硅橡胶密封条就不会出现内外槽之间的漏液现象。

图1. 碧云天、Bio-Rad等公司的电泳槽U型硅橡胶密封条的突起结构图。由于碧云天的BeyoGel™ PAGE预制胶的该部位是平的,使其兼容几乎所有厂家的小型胶电泳槽,所以电泳时须将具有突起结构的硅橡胶密封条(左图)取出后反过来安装(右图),使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液。

由于碧云天的BeyoGel™ PAGE预制胶比Life公司的XCell SureLock® Mini-Cell电泳槽配套的NuPAGE® Gel或Novex® Mini Gel略薄,所以需加特制挡板配合使用。如有需要,请在订购本产品时告知,碧云天会免费赠送该特制挡板。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.样品准备:可参考碧云天的EMSA/Gel-Shift试剂盒(GS002)化学发光法EMSA试剂盒(GS009)EMSA阳性对照试剂盒(GS010)。上样缓冲液推荐使用碧云天的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(GS006/GS007)
2.预制胶、电泳液的准备:
a.将BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶从包装袋中取出。
b.将预制胶固定在电泳槽中,平稳、缓慢地拔出梳子。
c.配制0.5X TBE电泳缓冲液。推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)TBE (5X premixed powder) (ST723)以及TBE (5X) (ST718)。1X TBE中含有89mM Tris-Borate、2mM EDTA,pH8.3。
d.内槽加满电泳液,外槽加入电泳液没过电泳槽底部的阳极即可。电泳槽推荐使用碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)
注:由于预制胶孔中有残留的储存缓冲液,所以建议用1毫升移液枪吸取电泳液轻轻吹打加样孔,将加样孔冲洗干净,去除气泡和残留的储存缓冲液,这样电泳的效果更佳。
3.上样:将10微升吸头或BeyoGold™凝胶电泳上样吸头(FTIP205/FTIP206/FTIP208/FTIP209)的尖端垂直方向轻轻插入到上样孔中即可上样,吸头避免戳破凝胶,更不能使胶板变形导致样品泄漏。注:最佳上样量须通过实验来确定,样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。
4.将电泳槽盖子盖好,并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红,黑对黑)。一般在100V电压,电泳30-90分钟左右即可,电泳至EMSA/Gel-Shift上样缓冲液中的蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘1/4处,停止电泳,切勿使探针跑出凝胶。实际电泳时间与电泳液质量、凝胶的浓度和数量等因素有关系,需自行适当调整。电泳电源推荐使用碧云天的BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) (E6080)BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)
5.取出玻璃胶板,将刀片从玻璃胶板一侧轻轻划一下,稍加用力慢慢扳开或用刮板轻轻撬开玻璃胶板,用刮板将凝胶取出。
6.后续实验步骤可参考EMSA/Gel-Shift试剂盒(GS002)化学发光法EMSA试剂盒(GS009)
常见问题:
1.电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳条带大幅扭曲、电泳时间大幅度延长:
可能原因是内槽缓冲液泄漏而导致。建议重新夹一下胶板,防止在电泳过程中内槽液面逐步降低。
2.使用自己配制的电泳缓冲液与上样缓冲液电泳后条带较模糊:
本预制胶pH为略偏碱性,缓冲液配制不当,或长期放置变质,都会对本预制胶的电泳效果产生影响。推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)TBE (5X premixed powder) (ST723)以及TBE (5X) (ST718)
3.在上样时不可将吸头过度插入上样孔中,吸头的过度插入会使胶板变形,导致样品泄漏。
参考文献:
1.Hellman LM, Fried MG. Nat Protoc. 2007. 2(8):1849-61.
2.Popova VV, Kurshakova MM, Kopytova DV. Mol Biol (Mosk). 2015. 49(3):472-81.
3.Fillebeen C, Wilkinson N, Pantopoulos K. J Vis Exp. 2014. (94):52230.
4.Stenger D, Gruissem W, Baginsky S. J Proteome Res. 2004. 3(3):662-4.
5.Gurevich I, Zhang C, Aneskievich BJ. Methods Mol Biol. 2010. 585:147-58.
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