EMSA PAGE凝胶配制试剂盒
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产品编号 GS298S
数量
¥ 188.00
产品包装:
30-50gels
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碧云天生产的EMSA PAGE凝胶配制试剂盒(EMSA PAGE Gel Preparation Kit),也称EMSA凝胶配制试剂盒(EMSA Gel Preparation Kit),提供了配制EMSA PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制不同浓度的EMSA PAGE凝胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

凝胶迁移实验(也称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验) (Electrophoretic mobility shift assay, EMSA),也称Gel Shift,是一种用于研究蛋白与核酸相互作用的高灵敏实验技术。最初主要用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用于蛋白与DNA、蛋白与RNA相互作用研究。EMSA技术基于进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白质与DNA或RNA复合物的迁移速度比游离线性DNA或RNA片段慢,从而导致DNA或RNA迁移位置在与蛋白质结合时滞后[1,2]。

本试剂盒适用于EMSA/Gel-Shift试剂盒(GS002)、化学发光法EMSA试剂盒(GS009)、化学发光法RNA EMSA试剂盒(GS606)等EMSA实验中EMSA凝胶的配制。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的EMSA PAGE凝胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
GS298S-1 40% Acr-Bis (39:1) 50ml
GS298S-2 TBE Buffer (5X) 50ml
GS298S-3 80% Glycerol 20ml
GS298S-4 凝胶聚合催化剂 0.8g
GS298S-5 TEMED Substitute 0.3ml
说明书 1份
保存条件:

TBE Buffer (5X)、80% Glycerol和凝胶聚合催化剂室温保存。40% Acr-Bis (39:1)和TEMED Substitute 4ºC避光保存。凝胶聚合催化剂用蒸馏水配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC保存,通常半年内有效。

注意事项:

凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后,应当分装成后-20ºC保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。

TEMED Substitute易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

TEMED Substitute易燃,有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

如果需要30% Acr-Bis (29:1) (ST003)可向碧云天单独订购。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 准备制备凝胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳凝胶的模具,如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)或其它适当模具。最好选择可以灌制较薄凝胶的模具(如0.75mm厚度),以便于干胶、转膜等后续操作。为获到更好的条带分离效果,可以选择可灌制较大EMSA凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净,需特别注意不能有SDS残留。
2. 10%凝胶聚合催化剂的配制:例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用蒸馏水溶解,并定容至1ml,即为10%凝胶聚合催化剂。
3. 配制一块常用EMSA PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需凝胶溶液体积:0.75mm厚度凝胶约5ml;1mm厚度凝胶约7ml;1.5mm厚度凝胶约10ml。均含约0.5ml的余量。
4. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,并根据下表配制凝胶:
成分 配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
4%胶 10 20 30 40 50
TBE Buffer (5X) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Ultrapure water 7.6 15.2 22.8 30.4 38.0
40% Acr-Bis (39:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
80% Glycerol 0.313 0.625 0.938 1.250 1.563
10%凝胶聚合催化剂 0.075 0.150 0.225 0.300 0.375
TEMED Substitute 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
成分 配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
4.5%胶 10 20 30 40 50
TBE Buffer (5X) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Ultrapure water 7.5 15.0 22.4 29.9 37.4
40% Acr-Bis (39:1) 1.1 2.3 3.4 4.5 5.6
80% Glycerol 0.313 0.625 0.938 1.250 1.563
10%凝胶聚合催化剂 0.075 0.150 0.225 0.300 0.375
TEMED Substitute 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
成分 配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶 10 20 30 40 50
TBE Buffer (5X) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Ultrapure water 7.4 14.7 22.1 29.4 36.8
40% Acr-Bis (39:1) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3
80% Glycerol 0.313 0.625 0.938 1.250 1.563
10%凝胶聚合催化剂 0.075 0.150 0.225 0.300 0.375
TEMED Substitute 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
成分 配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
5.5%胶 10 20 30 40 50
TBE Buffer (5X) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Ultrapure water 7.2 14.5 21.7 28.9 36.2
40% Acr-Bis (39:1) 1.4 2.8 4.1 5.5 6.9
80% Glycerol 0.313 0.625 0.938 1.250 1.563
10%凝胶聚合催化剂 0.075 0.150 0.225 0.300 0.375
TEMED Substitute 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
成分 配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
6%胶 10 20 30 40 50
TBE Buffer (5X) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Ultrapure water 7.1 14.2 21.3 28.4 35.5
40% Acr-Bis (39:1) 1.5 3.0 4.5 6.0 7.5
80% Glycerol 0.313 0.625 0.938 1.250 1.563
10%凝胶聚合催化剂 0.075 0.150 0.225 0.300 0.375
TEMED Substitute 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
注1:按照上述顺序依次加入各种试剂,加入TEMED Substitute前先混匀,加入TEMED Substitute后立即混匀,并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡,并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡,可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。
注2:通常10-30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关,上表中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25ºC时的推荐用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20ºC时建议使用正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议使用正常推荐用量的2倍。
5. EMSA实验步骤可参考EMSA/Gel-Shift试剂盒(GS002)或化学发光法EMSA试剂盒(GS009)。
参考文献:
1. Hellman LM, Fried MG. Nat Protoc. 2007. 2(8):1849-61.
2. Popova VV, Kurshakova MM, Kopytova DV. Mol Biol (Mosk). 2015. 49(3):472-81.
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