EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)(EMSA/Gel-Shift Binding Buffer,5X)是用于EMSA/Gel-Shift的结合缓冲液。通过EMSA，也称gel-shift，可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)可以用于EMSA研究时细胞核蛋白或纯化的转录因子和特定的双链寡核苷酸的结合反应。
EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)，DTT，甘油，EDTA，氯化钠，氯化镁以及Tris等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。
本EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)不仅适用于同位素标记的探针，也适用于地高辛(digoxin)或生物素(biotin)标记的探针。
每个包装的EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)，足够进行100个蛋白和探针的结合反应。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| GS005 | EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) | 200μl |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
需自备EMSA相关的所有其它试剂。
请仔细阅读完整个说明书后，再开始实验操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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阴性对照反应： |
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Nuclease-Free Water |
7μl |
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EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) |
2μl |
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细胞核蛋白或纯化的转录因子 |
0μl |
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标记好的探针 |
1μl |
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总体积 |
10μl |
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样品反应： |
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Nuclease-Free Water |
5μl |
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EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) |
2μl |
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细胞核蛋白或纯化的转录因子 |
2μl |
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标记好的探针 |
1μl |
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总体积 |
10μl |
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探针冷竞争反应： |
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Nuclease-Free Water |
4μl |
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EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) |
2μl |
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细胞核蛋白或纯化的转录因子 |
2μl |
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未标记的探针 |
1μl |
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标记好的探针 |
1μl |
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总体积 |
10μl |
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突变探针的冷竞争反应： |
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Nuclease-Free Water |
4μl |
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EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) |
2μl |
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细胞核蛋白或纯化的转录因子 |
2μl |
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未标记的突变探针 |
1μl |
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标记好的探针 |
1μl |
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总体积 |
10μl |
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Super-shift反应： |
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Nuclease-Free Water |
4μl |
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EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) |
2μl |
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细胞核蛋白或纯化的转录因子 |
2μl |
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目的蛋白特异抗体 |
1μl |
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标记好的探针 |
1μl |
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总体积 |
10μl |
(2) 按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针前先混匀，并且室温(20-25℃)放置10分钟，从而消除可能发生的探针和蛋白的非特异性结合，或者让冷探针优先反应。然后加入标记好的探针，混匀，室温(20-25℃)放置20分钟。
(3) 加入1微升EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X)，混匀后立即上样。
注意：有些时候溴酚蓝会影响蛋白和DNA的结合，建议尽量使用无色的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液。如果对于使用无色上样缓冲液在上样时感觉到无法上样，可以在无色上样缓冲液里面添加极少量的蓝色的上样缓冲液，至能观察到蓝颜色即可。
2. 电泳分析：EMSA的典型分析结果可以参见下面的图1。
图1.一个典型的EMSA/Gel-Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针+标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针+目的转录因子的特异抗体)。
