pAdEasy-1/BJ5183甘油菌(腺病毒重组配套菌)，是收集生长在对数期的pAdEasy/BJ5183重组菌，加入含有甘油的细菌冻存液(D0391)制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。

BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是腺病毒系统常用的重组细菌。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变，赋予BJ5183较强的重组能力，有利于转入目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。具有链霉素抗性。

pAdEasy-1/BJ5183甘油菌是在BJ5183菌株中提前转入了腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106),赋予该菌株氨苄抗性。将AdEasy-1/BJ5183制备成感受态细菌，在腺病毒质粒重组时直接转入线性化的携带目的基因的穿梭质粒pShuttle系列质粒等(D8115-D8137)，简化了实验步骤，也提高了腺病毒质粒重组效率。

pAdEasy-1/BJ5183甘油菌基因型：endA1sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]

本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。

腺病毒包装的具体方法和步骤可以参考如下网页:

https://www.beyotime.com/support/pShuttle.htm

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择，可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/strain.htm

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D8107	pAdEasy-1/BJ5183甘油菌(腺病毒重组配套菌)	200μg
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，一年有效。-80℃可以长期保存。

注意事项：

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.划平板接种：
取出pAdEasy-1/BJ5183甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头，蘸取少量pAdEasy-1/BJ5183甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB平板接近平行的角度，在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200µl塑料枪头，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量pAdEasy-1/BJ5183甘油菌，在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养：
pAdEasy-1/BJ5183甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量pAdEasy-1/BJ5183甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml LB的细菌培养试管内或装有100ml或更大体积LB的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备
可以使用碧云天的一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)、超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)或其它方法进行感受态细胞的制备。
4.腺病毒质粒的重组
将构建好的携带目的基因的腺病毒穿梭质粒pShuttle系列等(D8115-D8137)直接转化到pAdEasy-1/BJ5183感受态菌中进行重组得到腺病毒质粒，pAdEasy-1/BJ5183菌中质粒产量不高，需要转化到其他大肠杆菌菌株中进行扩增后再用于后续的腺病毒包装。
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