碧云天研发生产的人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒，即Human Telomere Length SYBR Green qPCR Kit，也称人端粒长度染料法qPCR试剂盒、端粒相对长度检测试剂盒、Human Telomere Length qPCR Kit with SYBR Green，是一种通过染料法qPCR (Quantitative PCR)扩增端粒与内参基因DNA，并快速、高效、灵敏地定量不同人类样品的端粒相对长度的试剂盒。本产品为防污染型，含有优化比例的高品质UDG酶和dUTP，可有效消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题造成的假阳性或CT值偏低。
端粒(Telomere, Tel)是真核生物染色体末端的由短串联DNA重复序列(TTAGGG)及其相关蛋白组成的保护性复合物。随着细胞分裂的进行，端粒的长度也会随之缩短。端粒极短的细胞就会进入衰老状态，这是一种不可逆的细胞生长停滞状态。因此，端粒的长度可作为判断细胞是否进入衰老状态的重要标志[1]。端粒可以作为受环境暴露和生活经历累积影响的生物标志物，也是重大疾病的风险因素[2]。越来越多的证据表明，端粒缩短对健康状况有负面影响，并与包括衰老和癌症在内的许多健康问题有关。因此，端粒长度的量化在细胞生物学研究的许多方面具有重要意义，包括染色体不稳定性、DNA修复、衰老、细胞凋亡、细胞功能障碍和致癌等[3]。
本试剂盒提供了qPCR实验所需的预混液BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)和特异性引物，预混液包含了BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、UDG酶、PCR Buffer、dNTPs、dUTP、SYBR Green I荧光染料、稳定剂和镁离子等所有的通用组分。本试剂盒设计了两对引物，一对是基于端粒重复序列设计的端粒引物(Telomere Primer Mix)；一对是基于12号染色体上编码酸性核糖体磷酸蛋白(Acidic ribosomal phosphoprotein, PO)的单拷贝基因(Single copy reference, SCR)而设计的内参引物(Control Primer Mix)，用于数据的均一化定量。
本试剂盒检测灵敏，扩增效率高，所用引物组检测1.25-20ng/μl范围内的基因组DNA样品时，扩增效率可达95%。不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA分别使用Telomere Primer Mix和Control Primer Mix扩增，并绘制标准曲线。结果显示两个标曲均呈现良好的线性关系，表明本试剂盒具有稳定的扩增效果，端粒相对长度定量准确度高。使用Telomere Primer Mix的扩增曲线及标准曲线可参考图1，使用Control Primer Mix的扩增曲线及标准曲线可参考图2。
图1.碧云天人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒(D8025)中Telomere Primer Mix对于不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA的扩增曲线及标准曲线。NTC, No Template Control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。注：由于端粒序列的串联重复特性，端粒引物组可能在NTC中形成微量的引物二聚体。NTC组Ct值为28或更大就表示反应中有引物二聚体的形成，可以作为阴性结果处理。
图2.碧云天人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒(D8025)中Control Primer Mix对于不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA的扩增曲线及标准曲线。NTC, No Template Control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒提供了Low ROX和High ROX，广泛兼容于无需ROX和需要Low ROX或High ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动，从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起，如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同，请根据实际所用仪器在配制反应体系时选择添加高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不加ROX。常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。
| 添加ROX类型 | 适用PCR仪 |
| 不需添加 | Bio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5; Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000; Roche LightCycler 480; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR |
| Low ROX | ABI: 7500 (Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems; Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000; Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon |
| High ROX | ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT (Fast); ABI StepOne (Plus) |
本试剂盒如果用于常规的96孔板qPCR检测(建议反应体系为20µl)或384孔板qPCR检测(建议反应体系为10µl)，本产品小包装分别可以进行50次和100次检测，中包装分别可进行200次和400次检测。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8025S-1 | BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG) | 500μl |
| D8025S-2 | Telomere Primer Mix (20X) | 50μl |
| D8025S-3 | Control Primer Mix (20X) | 50μl |
| D8025S-4 | Ultrapure Water | 400μl |
| D8025S-5 | Low ROX (50X) | 20μl |
| D8025S-6 | High ROX (50X) | 20μl |
| - | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8025M-1 | BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG) | 2ml |
| D8025M-2 | Telomere Primer Mix (20X) | 200μl |
| D8025M-3 | Control Primer Mix (20X) | 200μl |
| D8025M-4 | Ultrapure Water | 1.5ml |
| D8025M-5 | Low ROX (50X) | 80μl |
| D8025M-6 | High ROX (50X) | 80μl |
| - | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，一年有效。其中BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)、Low ROX (50X)、High ROX (50X)须避光保存，并尽量避免反复冻融。
注意事项：使用前请务必确保试剂完全融化，充分混匀后使用。混匀过程尽量避免产生气泡。
BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)、Low ROX (50X)、High ROX (50X)中含有荧光染料，保存本产品或设置PCR反应体系时应避免强光照射，以尽量避免荧光淬灭问题。
经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。
qPCR检测是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。PCR反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。虽然本产品为防污染型，但仍建议勿在PCR反应设置区域撕开PCR封板膜或打开PCR管盖，PCR产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。
建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Volume |
| BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG) | 10μl |
| Telomere Primer Mix (20X) or Control Primer Mix (20X)* | 1μl |
| Template | 2μl |
| Without or Low/High ROX (50X) | 0 or 0.4μl |
| Ultrapure Water | To 20μl |
| Sample | Tel | PO | ΔCT | ΔΔCT | 2-ΔΔCT |
| 1 | 16.55 | 20.80 | -4.25 | - | - |
| 2 | 18.42 | 22.73 | -4.31 | -0.06 | 1.04 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D0063 | 基因组DNA小量抽提试剂盒(通用型，离心柱式) | 50次 |
| D0088S | BeyoMag™基因组DNA小量抽提试剂盒(通用型, 磁珠法) | 50次 |
| D8018 | 人端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA染料法) | 50次/200次 |
| D8021 | 人端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA探针法) | 50次/200次 |
| D8025 | 人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒 | 50次/200次 |
| FASA011-1pc | BeyoGold™封板膜刮板 | 1个/袋 |
| FSF002 | 荧光定量PCR用封板膜(ABI分装) | 20片/包装 |
| FSF035 | BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型) | 20片/100片 |
| FSF039 | BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型, 进口分装) | 20片/100片 |
| FTIP631 | BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(0.5-10μl, 无色加长, 4.5cm) | 10盒/50盒 |
| FTIP635 | BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(1-200μl, 黄色加长, 5.6cm) | 10盒/50盒 |
| FTIP638 | BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(100-1000μl, 蓝色加长, 10.2cm) | 10盒/50盒 |
| FTUB333 | 荧光定量PCR用96孔板(ABI原装) | 20个/包装 |
| FTUB335 | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 无裙边, 透明) | 10个/盒, 5盒/箱 |
| FTUB337 | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 半裙边, 透明) | 10个/盒, 5盒/箱 |
| FTUB339 | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 高裙边, 磨砂) | 10个/盒, 5盒/箱 |
| FTUB384 | 荧光定量PCR用384孔板(ABI分装) | 20个/包装 |
| ST873-100ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (PCR级, Sterile) | 100ml |
| E6686 | BeyoFuge™掌上离心机(5000rpm) | 1套 |
| E6758 | BeyoFuge™基础型微孔板离心机(垂直式, 2500rpm) | 1套 |
