碧云天生产的猫细小病毒(FPV)探针法qPCR检测试剂盒，即Feline Panleukopenia Virus (FPV) Probe qPCR Kit，也称猫细小病毒(猫泛白细胞减少症、猫瘟)探针法qPCR试剂盒、Feline Parvovirus (FPV) Probe qPCR Kit，是一种通过探针法qPCR (Quantitative PCR)快速、有效、高灵敏地检测猫是否感染细小病毒的试剂盒。本产品为防污染型，含有优化比例的高品质UDG酶和dUTP，可有效消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题造成的假阳性或CT值偏低。
猫细小病毒(Feline panleukopenia virus or parvovirus, FPV)，又称猫瘟热病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性肠炎病毒，是一种单链DNA病毒，属于细小病毒科细小病毒属。在电子显微镜下，FPV呈圆形或六角形，无囊结构[1]。基因组长度约为5200nt，包含两个开放阅读框(Open reading frame, ORF)，分别编码结构蛋白(VP1和VP2)和非结构蛋白(NS1和NS2)。受FPV感染的动物白细胞急剧下降，同时伴有严重的发热、呕吐、腹泻等症状。病毒主要侵害幼猫，几乎所有猫科动物易感，死亡率较高，可通过患病动物的粪便、尿液和呕吐物迅速传播，在可妊娠期间垂直传播，导致胎儿小脑发育不全。因此，早期和快速诊断FPV是非常必要的，以便分离受感染的猫并实施针对性治疗，降低发病率和死亡率。
FPV感染的主要症状为发热、呕吐、腹泻，在临床上极易与其它胃肠道疾病混淆，因此仅依靠临床表现来诊断是否感染FPV较为困难。到目前为止，临床诊断FPV感染的方法有电子显微镜(Electron microscope, EM)、病毒分离(Virus isolation, VI)、乳胶凝集(Latex agglutination test, LAT)、血球凝集(Hemagglutination, HA)、ELISA和PCR分析等[2]。虽然电子显微镜和病毒分离较为特异和敏感，但这些技术在临床使用过程中昂贵且耗时。乳胶凝集法虽然检测速度快，但缺乏特异性。对于血球凝集或血清凝集抑制实验，由于FPV血凝活性弱且该方法对操作条件要求较高，相关实验条件较为苛刻，在临床检测中也易出现假阴性结果。此外，虽然ELISA和PCR因其高灵敏度和特异性被广泛使用，但操作略显复杂。而qPCR法操作方便简单，PCR扩增后无需电泳分析即可确定是否感染FPV。
本试剂盒提供了qPCR实验所需的预混液BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X)和特异性引物探针混合物。预混液包含了BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、UDG酶、PCR Buffer、dNTPs、dUTP、稳定剂和镁离子等所有的通用组分；引物探针混合物以FPV VP2基因最保守的序列作为靶点所设计，二者结合可用于FPV DNA的超高灵敏度定量检测。此外，本试剂盒提供Positive Control，即阳性对照，用于检测试剂盒本身是否能正常工作。
本试剂盒进行了优化，检测下限为2-20 copies/µl。本试剂盒用于阳性质粒检测的平均Ct值见下表，检测效果参考图1。
| Target | 10pg | 1pg | 100fg | 10fg | 1fg | 0.1fg | NTC |
| 平均Ct值 | 18.0 | 21.7 | 25.4 | 29.2 | 33.0 | 36.2 | Undetermined |
图1.碧云天猫细小病毒(FPV)探针法qPCR检测试剂盒(D7583)用于阳性质粒的检测效果图。将本试剂盒中的Positive Control稀释至每反应中的质粒量分别为10pg、1pg、100fg、10fg、1fg和0.1fg，然后用本试剂盒进行qPCR检测。使用Nuclease-free water作为阴性对照。NTC, negative control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒提供了Low ROX和High ROX，广泛兼容于无需ROX和需要Low ROX或High ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动，从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起，如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同，请根据实际所用仪器在配制反应体系时选择高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不加ROX。常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。
| 添加ROX类型 | 适用PCR仪 |
| 不需添加 |
Bio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5; Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000; Roche LightCycler 480; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR |
| Low ROX |
ABI: 7500(Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems; Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000; Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon |
| High ROX | ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT(Fast); ABI StepOne (Plus) |
本试剂盒如果用于常规的96孔板qPCR检测(建议反应体系为20µl)或384孔板qPCR检测(建议反应体系为10µl)，本产品小包装分别可以进行50次和100次检测，中包装分别可进行200次和400次检测。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7583S-1 | BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X) | 500μl |
| D7583S-2 | Primer/Probe Mix | 100μl |
| D7583S-3 | Positive Control | 100μl |
| D7583S-4 | Low ROX (50X) | 20μl |
| D7583S-5 | High ROX (50X) | 20μl |
| D7583S-6 | Nuclease-free Water | 500μl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7583M-1 | BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X) | 2ml |
| D7583M-2 | Primer/Probe Mix | 400μl |
| D7583M-3 | Positive Control | 400μl |
| D7583M-4 | Low ROX (50X) | 80μl |
| D7583M-5 | High ROX (50X) | 80μl |
| D7583M-6 | Nuclease-free Water | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，一年有效。其中BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X)、Primer/Probe Mix、Low ROX (50X)、High ROX (50X)须-20ºC避光保存，并尽量避免反复冻融。
注意事项：使用前需确保试剂完全融化，上下颠倒轻轻混匀后使用。混匀过程中尽量避免产生气泡。
Primer/Probe Mix、Low ROX (50X)、High ROX (50X)中含有荧光染料，保存本产品或设置PCR反应时应避免强光照射，以尽量避免荧光淬灭问题。
经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。
qPCR检测是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。PCR反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。虽然本产品为防污染型，但仍建议勿在PCR反应设置区域撕开PCR封板膜或打开PCR管盖，PCR产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。
建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Volume |
| BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X) | 10μl |
| Primer/Probe Mix | 2μl |
| Template | 2μl |
| Without or Low/High ROX (50X) | 0 or 0.4μl |
| Nuclease-free Water | To 20μl |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7580S | 猫细小病毒(FPV)染料法qPCR检测试剂盒 | 50次 |
| D7580M | 猫细小病毒(FPV)染料法qPCR检测试剂盒 | 200次 |
| D7583S | 猫细小病毒(FPV)探针法qPCR检测试剂盒 | 50次 |
| D7583M | 猫细小病毒(FPV)探针法qPCR检测试剂盒 | 200次 |
| D7586S | 猫细小病毒(FPV)等温扩增变色检测试剂盒 | 25次 |
| D7586M | 猫细小病毒(FPV)等温扩增变色检测试剂盒 | 100次 |
| D7589S | 猫细小病毒(FPV)等温扩增荧光检测试剂盒 | 25次 |
| D7589M | 猫细小病毒(FPV)等温扩增荧光检测试剂盒 | 100次 |
| FASA011-1pc | BeyoGold™封板膜刮板 | 1个/袋 |
| FSF002 | 荧光定量PCR用封板膜(ABI分装) | 20片/包装 |
| FSF035-20pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型) | 20片/包装 |
| FSF035-100pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型) | 100片/包装 |
| FSF039-20pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型, 进口分装) | 20片/包装 |
| FSF039-100pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型, 进口分装) | 100片/包装 |
| FTUB325-125pcs | BeyoGold™ qPCR八联排管(0.2ml, 平盖, 透明) | 125排/盒 |
| FTUB325-1250pcs | BeyoGold™ qPCR八联排管(0.2ml, 平盖, 透明) | 125排/盒, 10盒/箱 |
| FTUB326-300pcs | BeyoGold™ qPCR八联排管(0.2ml, 平盖, 透明, 6条/袋) | 6条/袋, 50袋/箱 |
| FTUB326-1500pcs | BeyoGold™ qPCR八联排管(0.2ml, 平盖, 透明, 6条/袋) | 6条/袋, 250袋/箱 |
| FTUB333 | 荧光定量PCR用96孔板(ABI原装) | 20个/包装 |
| FTUB384 | 荧光定量PCR用384孔板(ABI分装) | 20个/包装 |
| FTUB335-10pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 无裙边, 透明) | 10个/盒 |
| FTUB335-50pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 无裙边, 透明) | 10个/盒, 5盒/箱 |
| FTUB337-10pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 半裙边, 透明) | 10个/盒 |
| FTUB337-50pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 半裙边, 透明) | 10个/盒, 5盒/箱 |
| FTUB339-10pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 高裙边, 磨砂) | 10个/盒 |
| FTUB339-50pcs | BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 高裙边, 磨砂) | 10个/盒, 5盒/箱 |
