碧云天研发的BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)，是一种使用碧云天的D7301 BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit时，克服因模板高GC含量所导致的PCR扩增障碍的PCR增强剂。高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点，本产品可用于含有肝素、柠檬酸钠以及EDTA等抗凝血的直接PCR反应，从而大大提高了高GC含量DNA模板的扩增效率及扩增的特异性。本产品也可以用于普通PCR时扩增高GC含量的目的片段。

BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)还可以适用于商业化的常见的多种耐血DNA聚合酶，如碧云天的D7241 HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)和D7243 HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)，NEB的Hemo KlenTaq等。

本产品直接扩增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果显著优于常用的甜菜碱、DMSO等的效果。

本产品如果用于50μl的PCR反应体系，足够用于80个反应；如果用于20μl的PCR反应体系，足够用于200个反应。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D7303S	BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)	2ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

在使用本产品BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)的同时，必须同时使用和BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit配套的最终浓度为1X的PCR Buffer。

本产品溶解时如果有结晶状沉淀物，可以在50℃水浴温育片刻促进溶解，并确保完全溶解后使用。

请尽量使用新近采集的抗凝血样本进行检测；如果是冻存的样本，尽量避免反复冻融，以免在冻融过程中导致目的基因的断裂和降解。

设置PCR反应体系时，抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5-10%左右，可以直接添加到PCR体系中，无需进行任何额外处理。

PCR反应结束之后，建议3000-5000g离心3-5min以沉淀血细胞碎片，便于吸取上清用于电泳分析等。注意：由于抗凝血本身的原因，PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。

由于PCR反应非常灵敏，可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.PCR反应参数的设置请参照特定的BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit的说明书进行。通常对于扩增高GC含量的DNA模板，延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
2.反应体系的设置可以参考特定的BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit的PCR反应体系进行，仅仅添加反应总体积一半的本试剂盒所提供的BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应：
a.融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将BeyoMulti™ DNA polymerase置于冰浴上或冰盒内。
b.参考下表在冰浴上设置PCR反应体系(如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和BeyoMulti™酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中也可以包括引物)：

试剂	20μl体系	50μl体系	终浓度
Nuclease-Free Water	(5-x-0.4n)μl	(12.5-x-n)μl	-
10X BeyoMulti™ PCR Buffer	2μl	5μl	1X
BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)	10μl	25μl	-
dNTP (2.5mM each)	2μl	5μl	0.25mM each
Primer mix (10μM each)	0.4μl×n	1μl×n	0.2μM each
Template	xμl	xμl	-
Control template and primer mix	-	-
Multiplex™ DNA polymerase	1μl	2.5μl	-
Total volume	20μl	50μl	-

注1：n代表多重PCR时使用的引物对种类的数量，即拟扩增片段种类的数量。
注2：关于模板使用量。DNA模板的用量对PCR扩增有很大影响。对于高复杂度的DNA样本，如哺乳动物基因组DNA，推荐在20μl反应体系中使用5ng至0.5μg模板DNA。对于低复杂度的DNA，如λDNA或质粒DNA，推荐在20μl反应体系中使用5pg至5ng的模板DNA。
注3：关于PCR模板为抗凝血的情况。PCR模板为抗凝血时，模板的用量一般为PCR反应体系总体积的1-20%，建议起始使用量为5%；如果抗凝血多重PCR反应检测的是基因组的DNA片段，可以适当减少抗凝血用量；如果抗凝血多重PCR反应检测的是血液样品中某种病毒或细菌等微生物的目的DNA片段，建议使用50μl的PCR体系，并使用较大的模板血量。对于高GC含量的PCR扩增，可以使用扩增高GC含量DNA片段的D7303S BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)，或者尝试向PCR体系中加入终浓度1-10% (体积百分比)的DMSO。
注4：关于PCR模板为植物样品的情况。对于20μl和50μl PCR反应体系，植物样品的推荐用量分别为0.1-1mm和0.3-3mm直径叶片或类似大小其它比较柔嫩的植物组织。如果模板为植物种子，尽量使用鲜嫩的植物种子。用干净的解剖刀去掉种子外壳，剪下直径约0.5-2mm的组织直接放入PCR管内；若种子太小，如番茄种子，可直接使用1-2粒完整的种子放入PCR管内进行扩增。50μl PCR体系，植物叶片或是种子直径不宜超过3mm，太多模板易造成PCR抑制成分偏多，影响PCR效果。推荐取两份植物组织样品进行平行的PCR实验，以降低取样的不稳定性。为确保取样的均一性，建议使用专用的打孔器或解剖刀进行取样，并注意防止取样过程中的交叉污染。每一次取样，可以用2%的次氯酸钠溶液清洗打孔器或解剖刀。对于高GC含量的PCR扩增，可以尝试向PCR体系中加入终浓度1-10% (体积百分比)的DMSO。
注5：关于引物浓度。通常引物的终浓度为0.2μM时可获得良好的PCR扩增效果，但也可以根据情况在0.05-0.4μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率低的情况下，可提高引物浓度；发生非特异性扩增时，可降低引物浓度。
c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油(ST275 Mineral oil (矿物油))。
e.把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上，开始PCR反应。PCR反应参数的设置可以参考该BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit的常规参数，同时可以考虑适当延长延伸时间。
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