碧云天的Easy-Load™ PCR Master Mix(Orange, 2X)是一种使用特别便捷的含有橙色染料(电泳位置约50bp)的2倍浓度的PCR预混液,含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer,只需加入模板DNA、引物和水即可进行PCR扩增,并且扩增完毕后可以直接上样电泳。主要适用于cDNA或基因组DNA等的常规PCR扩增,特别适合于定性或半定量的PCR扩增,也可用于长度小于2kb的DNA片段的扩增和克隆。
Easy-Load™ PCR Master Mix(Orange, 2X)中已经含有所有的通用组分,用户只需自备引物、模板DNA和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作,使操作更加快捷,也减少了PCR操作过程中可能导致的污染,使PCR的重复性更好。
Easy-Load™ PCR Master Mix(Orange, 2X)可以扩增出长达8kb的片段,但通常更适合用于扩增2kb以下的DNA片段。
本产品中加入了橙色的电泳示踪染料,其在浓度为1%琼脂糖胶中的迁移位置大约位于50bp处。PCR结束后可直接进行电泳检测,无需再添加上样缓冲液。橙色示踪染料不会影响对相应DNA条带的观察和检测。
本产品稳定性高,经测试,反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。反复冻融15次前后,使用不同引物扩增100-
1500bp间不同长度目的片段的效果如图1所示。
图1. 本产品反复冻融15次前后扩增不同长度产物的效果图。A. 反复冻融前本产品进行PCR的扩增结果。B.反复冻融15次后的本产品进行PCR的扩增结果。除本产品是否反复冻融15次外,A和B的反应体系完全相同,电泳的上样量也相同。
每毫升Easy-Load™ PCR Master Mix若用于50微升的PCR反应体系,足够用于40个反应;若用于20微升的PCR反应体系,足够用于100个反应。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7259-1ml | Easy-Load™ PCR Master Mix (Orange, 2X) | 1ml |
D7259-4ml | Easy-Load™ PCR Master Mix (Orange, 2X) | 1ml×4 |
D7259-20ml | Easy-Load™ PCR Master Mix (Orange, 2X) | 1ml×20 |
D7259-100ml | Easy-Load™ PCR Master Mix (Orange, 2X) | 1ml×100 |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存至少一年有效。适当避免反复冻融。如需频繁使用,可取适量存放于4℃,至少3天内有效。
注意事项:
由于PCR反应非常灵敏,可使目的基因扩增超过1000万倍,在设置PCR反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR过程中每个循环的出错几率约为2.2×10-5,对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶,例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR进行定性或定量检测,Taq DNA polymerase是最佳选择。
尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果,但仍宜适当避免反复冻融本产品,多次反复冻融可能使产品性能下降。
使用本产品前,一定要完全融化,并上下颠倒轻轻混匀后才能使用,并尽量避免产生气泡。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
试剂 | 最终浓度 | 体积 | 体积 |
双蒸水或Milli-Q水 | - | (21-x)μl | (8.4-y)μl |
模板DNA | 10pg-1μg | xμl | yμl |
引物混合物(10μM) | 0.8μM | 4μl | 1.6μl |
Easy-Load™ PCR Master Mix (Orange, 2X) | 1X | 25μl | 10μl |
总体积 | - | 50μl | 20μl |