碧云天生产的BeyoRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒,即BeyoRT™ Q First Strand cDNA Synthesis Kit,是一种采用了经过改造和优化特别适合定量PCR(quantitative PCR, qPCR)的高精确度的BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶,可以用于以总RNA、mRNA等为模板反转录合成cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
使用本试剂盒合成的第一链,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建,尤其是逆转录所得目的基因的克隆等。
本试剂盒中使用的BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶是最常用的优质反转录酶之一,广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成,特别适合用于qPCR和一步法的qRT-PCR,本产品的反转录产物也适合用于常规的PCR、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建,以及逆转录所得目的基因的克隆等。使用BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶对总RNA进行反转录,之后以不同稀释倍数的cDNA为模板,通过qPCR检测目的基因的结果请参考图1。
图1.BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶对总RNA进行反转录后用于qPCR检测的效果图。从HEK293T细胞抽提获得的总RNA 2µg,在20μl反转录体系中进行反转录,反转录后取1μl (100%)或不同稀释比例(1μl的10%、1%、0.1%、0.01%)反转录产物进行GAPDH cDNA 151bp目的片段的qPCR扩增和电泳检测。A. 扩增曲线图。B. 溶解曲线图。C. qPCR扩增产物的电泳图。NTC (no-template control),用水代替反转录产物。qPCR反应体系20µl,使用碧云天生产的D7260 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X)。实际检测效果会和特定实验条件有关,图中结果仅供参考。
使用本试剂盒也可以轻松完成长度为8 kb以下基因的反转录(参考图2),反转录的最大长度可以达到12 kb。
图2.使用本试剂盒对总RNA反转录后,对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-12kb的cDNA可以非常高效地被反转录。实际反转录特定目的基因片段后,PCR扩增较大片段时可能需要适当优化引物和PCR扩增条件,图中的扩增效果仅供参考。
本试剂盒提供了RNase Inhibitor,确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得良好的反转录效果。
本试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物,前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录,后者适合用于任何RNA的反转录。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
失活或抑制:80℃孵育10min可以导致本产品中的BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶有抑制作用。
用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时,不同包装的本试剂盒足够分别进行20个、100个和500个cDNA第一链样品的合成。
关于碧云天不同反转录酶的比较和选择,可参考相关网页:http://www.beyotime.com/support/reversetranscriptase.htm
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7190S-1 | BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | 20μl |
D7190S-2 | Reaction Buffer(5X) | 0.1ml |
D7190S-3 | RNase Inhibitor (20U/μl) | 20μl |
D7190S-4 | dNTP Mix (10 mM each) | 40μl |
D7190S-5 | Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) | 20μl |
D7190S-6 | Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) | 20μl |
D7190S-7 | DEPC-treated Water | 0.3ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7190M-1 | BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | 100μl |
D7190M-2 | Reaction Buffer(5X) | 0.5ml |
D7190M-3 | RNase Inhibitor (20U/μl) | 100μl |
D7190M-4 | dNTP Mix (10 mM each) | 200μl |
D7190M-5 | Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) | 100μl |
D7190M-6 | Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) | 100μl |
D7190M-7 | DEPC-treated Water | 1.5ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7190L-1 | BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | 500μl |
D7190L-2 | Reaction Buffer(5X) | 2.5ml |
D7190L-3 | RNase Inhibitor (20U/μl) | 500μl |
D7190L-4 | dNTP Mix (10 mM each) | 1ml |
D7190L-5 | Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) | 500μl |
D7190L-6 | Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) | 500μl |
D7190L-7 | DEPC-treated Water | 7.5ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:对于GC含量比较高的RNA的反转录,产品的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
模板(右侧3种任选其中一种) | Total RNA | 0.1ng-5μg |
或poly(A) RNA/mRNA | 10pg-0.5μg | |
或specific RNA | 0.01pg-0.5μg | |
引物(右侧3种任选其中一种) | Oligo(dT)18 primer | 1 μl |
或Random Hexamer primer | 1 μl | |
或gene-specific primer | 15-25pmol | |
DEPC-treated Water | - | To 12μl* |
选择性步骤:如果模板RNA的GC含量较高(例如大于55%)或者有比较严重的二级结构,混匀后微离心以把液体沉降至管底,65℃孵育5min,随后立即置于冰上冷却,以打开RNA中一些比较稳定的二级结构。 | ||
Reaction Buffer (5X) | - | 4μl |
RNase Inhibitor (20U/μl) | - | 1μl |
dNTP Mix (10mM each) | - | 2μl |
BeyoRT™ QM-MLV反转录酶 | - | 1μl |
总体积 | 20μl |