cDNA第二链合成试剂盒，Second Strand cDNA Synthesis Kit是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链，最终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。
本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick
translation)反应催化形成cDNA第二链。
使用本试剂盒合成的双链cDNA，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。
本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时，足够进行20个cDNA第二链样品的合成。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7172-1 | RNase H(1U/μl) | 10μl |
| D7172-2 | DNA Polymerase I(10U/μl) | 30μl |
| D7172-3 | Reaction Buffer(10X) | 100μl |
| － | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
进行第二链合成时，dNTP比较适当的最终浓度约为0.2mM。如果最终浓度过低，在反应体系中需要适当补充dNTP。
如果希望获得平末端的双链cDNA，可以用T4 DNA Polymerase(D7051)或DNA末端平滑试剂盒(D7012)处理。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 用反转录酶，例如BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) (D7160/D7161/D7162)或BeyoRT™ II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) (D7167/D7168)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
2. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂：
| Reaction Buffer (10X) | 8μl |
| 无核酸酶去离子水 | 68μl |
| RNase H (1U/μl) | 1μl |
| DNA Polymerase I (10U/μl) | 3μl |
3. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
4. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
5. 加入5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
6. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
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