cDNA第二链合成试剂盒
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产品编号 D7172
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¥ 307.00
产品包装:
10次
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cDNA第二链合成试剂盒,Second Strand cDNA Synthesis Kit是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链,最终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。
本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick
translation)反应催化形成cDNA第二链。
使用本试剂盒合成的双链cDNA,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。
本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时,足够进行20个cDNA第二链样品的合成。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7172-1 RNase H(1U/μl) 10μl
D7172-2 DNA Polymerase I(10U/μl) 30μl
D7172-3 Reaction Buffer(10X) 100μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项: 
进行第二链合成时,dNTP比较适当的最终浓度约为0.2mM。如果最终浓度过低,在反应体系中需要适当补充dNTP。
如果希望获得平末端的双链cDNA,可以用T4 DNA Polymerase(D7051)DNA末端平滑试剂盒(D7012)处理。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 用反转录酶,例如BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) (D7160/D7161/D7162)或BeyoRT™ II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) (D7167/D7168)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
2. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer (10X) 8μl
无核酸酶去离子水 68μl
RNase H (1U/μl) 1μl
DNA Polymerase I (10U/μl) 3μl

3. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
4. 15℃孵育2小时。(注意:反应温度不能超过15℃)
5. 加入5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
6. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。

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