DNase I
收藏
产品编号 D7076
数量
¥ 692.00
产品包装:
200U 1000U
产品简介
使用说明
说明书下载
相关产品
相关论文
产品问答

DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。
DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
特点:不含RNase(RNase free),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNase I失活所需的EDTA。
用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板; DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
来源:从牛胰腺纯化得到。
分子量:约32kDa(单体)。
活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。
纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),25mM MgCl2,1mM CaCl2
失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7076-1 DNase I,RNase-free(50U/μl) 1000U
D7076-2 Reaction Buffer(10X) 1ml
D7076-3 EDTA(25mM) 1ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项: 
如需对酶进行稀释,可以用酶储存液(50mM Tris-acetate(pH 7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol)进行稀释。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除:
a.向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂:

RNA 1μg
Reaction Buffer (10X) 1μl
补充经DEPC处理的去离子水 至9μl
DNase I(1U/μl) 1μl

注意:如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量Ribonuclease inhibitor以防止RNA降解则更佳。
b.37℃孵育30分钟。
c.向上述反应体系中加入1μl 25mM EDTA,65℃孵育10分钟以失活DNase I。注意:在没有鏊合剂如EDTA等存在情况下加热,RNA可被水解。
d.上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。
2.体外RNA转录后模板DNA的去除:
a.在每含有0.5μg模板DNA的转录反应体系中加入1U DNase I。注意:在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。
b.37℃ 孵育15分钟。
c.酚/氯仿抽提失活DNase I。
3.缺口平移进行DNA标记:
a.参考下表格设置反应体系:

Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I 2.5μl
3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP) * 1.25μl
[α-32P]-dNTP, ~110TBq/mmol (3000Ci/mmol) 1.85-3.7MBq (50-100μCi)
DNase I (freshly diluted to 0.002U/μl)** 1μl
DNA Polymerase I, E.coli 0. 5-1.5μl (5-15U)
Template DNA 0.25μg
补充无核酸酶去离子水 至25μl

*  3 dNTP Mixture(1mM each, without the labeled dNTP):分别取除已经标记的dNTP外的3种dNTP(100mM)各1μl加入到97μl 的无核酸酶的去离子水中混匀即可。例如标记的为dATP,则需混合dTTP、dCTP和dGTP三种dNTP至每种的最终浓度为1mM。配制好的dNTP可存放于-20℃以备后续使用。
** DNase I可以用1X Reaction Buffer for DNA Polymerase I进行稀释。
Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),100mM MgCl2,10mM DTT。
b. 立即15℃孵育15~60分钟。
c. 上述反应体系中加入1μl of 0.5M EDTA(pH 8.0)终止反应。
d. 从中取出少量例如1μl检测标记效率。通常标记效率至少可以达到108cpm/μg DNA。
e. 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-32P]-dNTP,以纯化获得标记的DNA。
4. 其它用途可以参考上述用途进行。


相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献:
2. Hui H, Rao W, Zhang L, Xie Z, Peng C, Su N, Wang K, Wang L, Luo P, Hao YL, Zhang S, Fei Z.
Neurochem Int . 2016 Mar;94:23-31. (IF 3.881)
3. Qiao C, Liu J, Yang J, Li Y, Weng J, Shao Y, Zhang X.
Biomaterials . 2016 Apr;85:1-17. (IF 10.317)
4. Zhu W, Xie K, Xu Y, Wang L, Chen K, Zhang L, Fang J.
Virus Res . 2016 Jun 2;217:125-32. (IF 2.934)
5. Yang S, Li SS, Yang XM, Yin DH, Wang L.
Oncol Lett . 2016 Jun;11(6):4167-4176. (IF 2.311)
6. Zhu G, Chen J, Tian J, Ge L, Xing A, Tang G.
Mol Med Rep . 2016 Jul;14(1):509-14. (IF 2.1)
7. Feng Q, Hu ZY, Liu XQ, Zhang X, Lan X, Geng YQ, Chen XM, He JL, Wang YX, Ding YB.
Reprod Biomed Online . 2016 Nov 23. pii: S1472-6483(16)30614-9. (IF 3.218)
8. Sun XY, Duan ZJ, Liu Z, Tang SX, Li Y, He SC, Wang QM, Chang QY.
Exp Ther Med . 2016 Dec;12(6):3716-3722. (IF 1.785)
9. Li J, Mao Q, He J, She H, Zhang Z, Yin C.
Stem Cell Res Ther . 2017 Mar 9;8(1):55. (IF 5.116)
10. Zhang Q, Cheng G, Qiu H, Wang Y, Wang J, Xu H, Zhang T, Liu L, Tao Y, Ren Z.
Exp Ther Med . 2017 Aug;14(2):1795-1801. (IF 1.785)
11. Liu X, Tian F, Wang S, Wang F, Xiong L.
REJUV RES . 2017 Dec 22. doi: 10.1089/rej.2017.1999. [Epub ahead of print] (IF 3.811)
12. Peng C,Rao W,Zhang L,Gao F,Hui H,Wang K,Dai S,Yang Y,Luo P,Ma Y,Ma W,Yu X,Fei Z
CELL PHYSIOL BIOCHEM. 46(6):2311-2324. (IF 5.5)
13. Li H, Zhang B, Lu X, Tan X, Jia F, Xiao Y, Cheng Z, Li Y, Silva DO, Schrekker HS, Zhang K, Mirkin CA.
P NATL ACAD SCI USA. 115(17):4340-4344. (IF 9.412)
14. Pan Z,Fan Z,Ma J,Liu H,Shen L,He B,Zhang M
Am J Transl Res. 11(6):3801-3815. eCollection 2019. (IF 3.375)
15. Zhao RZ,Jiang S,Ru NY,Jiao B,Yu ZB
CAN J PHYSIOL PHARM. 97(10):980-988. (IF 1.946)
18. Jin Liu,Yong-Ming Zhu,Yi Guo,Liang Lin,Zhan-Xiang Wang,Feng Gu,Xin-Yi Dong,Ming Zhou,Yi-Fan Wang,Hui-Ling Zhang
Front Pharmacol. doi: 10.3389/fphar.2020.00812. (IF 4.225)
19. Wen Li,Zhuo Luo,Chang-Yu Yan,Xiao-Hua Wang,Zheng-Jie He,Shu-Hua Ouyang,Chang Yan,Li-Fang Liu,Qing-Qing Zhou,Han-Lu Mu,Hai-Biao Gong,Wen-Jun Duan,Lei Liang,Hiroshi Kurihara,Du Feng,Yi-Fang Li,Rong-Rong He
Theranostics. doi: 10.7150/thno.46921. (IF 8.579)
20. Jian Tan,Zhiguo Wu,Jun Liu,Wenting Zhang,Wanqiu Yuan,Hong Peng
J Cell Mol Med. doi: 10.1111/jcmm.15566. (IF 4.486)