碧云天研发生产的T4 UvsX Recombinase，也称T4 UvsX重组酶，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台通过大肠杆菌表达、纯化获得的一种来源于T4噬菌体的重组酶。T4 UvsX Recombinase属于E.coli RecA重组酶家族，它非特异地与单链DNA (ssDNA)结合并在其上进行聚合化而形成螺旋状细丝(helical filaments)，后者可结合于双链DNA (dsDNA)并起始链置换反应。由于在T4噬菌体感染后期重组复合体启动噬菌体进行DNA复制，因此UvsX也与重组依赖的DNA修复途径有关[1]。
T4 UvsX Recombinase可用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)。RPA技术不需要对模板进行热变性预处理，可以在恒定的温度下(37-42ºC)进行，扩增时间也较短，相较于其他的PCR技术具有灵敏、快速和特异的优点[2][3]。RPA技术可用于开发多种DNA和RNA病原体的检测方案，包括MERS (中东呼吸综合征）、HIV-11、埃博拉病毒以及COVID-19，检测下限通常低于100个拷贝。越来越多的证据表明，RPA技术可以作为开发新的诊断工具的一种潜在方法，具有及时、准确、具体的特点[4]。
RPA反应需要以下组分：重组酶T4 UvsX Recombinase (D7059)，重组酶载入因子T4 UvsY Protein (D7061)，ssDNA结合蛋白T4 gp32 Protein (D7057)，以及DNA聚合酶(如Bsu DNA Polymerase, Large Fragment) (D7055)等。引物与模板的结合不需要通过退火来实现，而是在UvsY和ATP的帮助下，UvsX与引物结合形成一种核酸蛋白复合物，在dsDNA中寻找同源序列。一旦被定位到同源序列，核酸蛋白复合物就会侵入dsDNA，形成D环结构，启动链交换反应，未被结合的链则被gp32稳定，防止引物解离。接下来，DNA聚合酶从引物的3'端延伸出一条互补链，完成双链的复制，整个过程循环进行。RPA反应除了以上核心蛋白还需要ATP (D7378)、肌酸激酶(Creatine Kinase)以及磷酸肌酸(Phosphocreatine)等作为能量提供系统。肌酸激酶的作用是ATP再生，它可以将磷酸肌酸和ADP转化为肌酸和ATP[5, 6]。
碧云天T4 UvsX Recombinase在RPA反应中的作用请参考图1。
图1.碧云天T4 UvsX Recombinase (D7059)在RPA反应中的作用效果图。以pUC18为模板，使用正向引物Primer-F (5'-AGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCC-3')和反向引物Primer-R (5'-TGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACA-3')进行RPA反应。配制50µl反应体系：50mM Tris-HCl (pH7.9), 2mM DTT, 100mM Potassium Acetate, 7.5% (w/v) PEG8000, 30mM Phosphocreatine, 100ng/μl Creatin Kinase, 3mM ATP, 200μM dNTPs, 50ng pUC18, 500nM Primer-F, 500nM Primer-R, 200ng/μl UvsX (D7059), 60ng/μl UvsY (D7061), 600ng/μl gp32 (D7057), 0.4U/μl Bsu DNA Polymerase, Large Fragment (D7055), 14mM Magnesium Acetate。设置无pUC18的阴性对照，以及无UvsX、无UvsY、无gp32和无Bsu DNA polymerase, Large Fragment的对照。配制好反应体系后，最后统一将2.5μl浓度为0.28M的Magnesium Acetate加到管壁上，离心以启动反应，39ºC孵育30分钟，随后60ºC加热10分钟。反应结束后离心，从每管取出4μl样品，分别加入0.8µl DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析，产物为长度为293bp的片段。图A表明UvsX、gp32、Bsu DNA polymerase, Large Fragment对于RPA反应都是必需的。当体系中不含UvsY时，可以观察到微弱的条带，说明UvsY可以提高RPA反应的效率。图B展示了不同浓度UvsX在RPA反应中的作用。RPA反应产物的量随UvsX浓度的升高而增多，当体系中UvsX的终浓度为200ng/μl时，产物的量趋于饱和。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因为T4噬菌体的uvsX基因。
分子量：约45kDa。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含核糖核酸酶。
Storage (Dilution) Buffer：20mM Tirs-HCl (pH7.5)，300mM NaCl，1mM DTT，0.2mM EDTA，50% Glycerol。
失活或抑制：60ºC孵育10分钟可使T4 UvsX Recombinase失活。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7059S-1 | T4 UvsX Recombinase (2mg/ml) | 50μl |
| D7059S-2 | Storage (Dilution) Buffer | 200μl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7059M-1 | T4 UvsX Recombinase (2mg/ml) | 250μl |
| D7059M-2 | Storage (Dilution) Buffer | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7059L-1 | T4 UvsX Recombinase (2mg/ml) | 1ml |
| D7059L-2 | Storage (Dilution) Buffer | 4ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，两年有效，避免反复冻融。
注意事项：配制反应体系时，会出现白色沉淀，属于正常现象，不影响实验结果。
该产品在常温下即可反应，配制反应体系时需全程在冰上操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7055S | Bsu DNA Polymerase, Large Fragment | 200U |
| D7055M | Bsu DNA Polymerase, Large Fragment | 1000U |
| D7057S | T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白) | 100μg |
| D7057M | T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白) | 500μg |
| D7057L | T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白) | 2mg |
| D7371 | dNTP Mixture (2.5mM each) | 1ml |
| D7373 | dNTP Mixture (25mM each) | 250μl |
| D7378-250μl | ATP (100mM, Nuclease free) | 250μl |
| D7378-1ml | ATP (100mM, Nuclease free) | 1ml |
| D7378-5ml | ATP (100mM, Nuclease free) | 5ml |
| D7059S | T4 UvsX Recombinase | 100μg |
| D7059M | T4 UvsX Recombinase | 500μg |
| D7059L | T4 UvsX Recombinase | 2mg |
| D7061S | T4 UvsY Protein | 100μg |
| D7061M | T4 UvsY Protein | 500μg |
| D7061L | T4 UvsY Protein | 2mg |
| ST043-1g | DTT | 1g |
| ST043-5g | DTT | 5g |
| ST043-25g | DTT | 25g |
| ST043-100g | DTT | 100g |
| ST483 | PEG8000 | 500g |
| ST1483-100g | 乙酸镁四水合物(99%, Reagent grade) | 100g |
| ST1483-500g | 乙酸镁四水合物(99%, Reagent grade) | 500g |
| ST1591-50g | 乙酸钾(≥99.0%, Reagent grade) | 50g |
| ST1591-250g | 乙酸钾(≥99.0%, Reagent grade) | 250g |
| ST1591-1kg | 乙酸钾(≥99.0%, Reagent grade) | 1kg |
