T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白)
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产品编号 D7057S
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¥ 205.00
产品包装:
100μg 500μg 2mg
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碧云天生产的T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白),也称T4 gp32 protein,T4 gp32蛋白或T4噬菌体gp32蛋白,是一种由噬菌体T4基因组的基因32编码的单链DNA (ssDNA)结合蛋白,常用于基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification, RPA)的等温扩增反应等。

T4 Gene 32 Protein为T4噬菌体DNA复制和修复所必需。在T4噬菌体DNA复制过程中,T4 gp32结合并稳定暂时形成的单链DNA区域。在使用电子显微镜观察细胞内DNA结构的时候,该蛋白也被广泛用于稳定和标记单链DNA区域。此外,T4 gp32还被报道可以促进限制性内切酶和T4 DNA聚合酶活性,在RT-PCR过程中提高逆转录酶效率,提高PCR产物产量。

T4 gp32 protein可用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification, RPA)。RPA主要包括以下几个组分:重组酶(Recombinase) T4 UvsX,重组酶载入因子(Recombinase loading factor) T4 UvsY,Bsu DNA聚合酶大片段以及单链DNA结合蛋白(Single-strand binding protein) (如T4 gp32 Protein)等。在ATP参与的情况下,UvsX与引物相结合形成复合物,扫描DNA模板,寻找到与引物配对的核酸序列。一旦引物被定位到了DNA模板的同源序列,可以直接引发链交换反应形成D-Loop结构:ATP水解产生ADP,UvsX被gp32取代而从DNA模板上解离下来,gp32作为单链结合蛋白可以稳定在被置换的DNA链的D-Loop结构中,防止引物解离。UvsX被解离后,引物3'末端暴露并被Bsu DNA聚合酶识别。随后聚合酶与DNA模板配对并进行引物的延伸和模板的扩增。重组酶载入因子T4 UvsY和拥挤试剂(Crowding reagent) Carbowax20M的加入有利于UvsX与引物的结合,即有利于重组酶UvsX的载入。

碧云天T4 gp32 protein在RPA反应中的作用请参考图1。

图1.碧云天T4 gp32 protein (D7057)在RPA反应中的效果图。以pUC18为模板,使用正向引物Primer-F (5'-AGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCC-3')和反向引物Primer-R (5'-TGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACA-3')进行RPA反应。配制50µl反应体系:包含缓冲液, dNTPs, pUC18, Primer-F, Primer-R, UvsX (D7059), UvsY (D7061), 600ng/μl T4 Gene 32 Protein (D7057), Bsu DNA Polymerase, Large Fragment (D7055)。设置无pUC18的阴性对照,以及无UvsX、无UvsY、无gp32和无Bsu DNA polymerase, Large Fragment的对照。配制好反应体系后,最后统一将Mg(Ac)2加到管壁上,离心以启动反应,39ºC孵育30分钟,随后60ºC加热10分钟。反应结束后离心,从每管取出4μl样品,分别加入0.8µl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析,产物为长度为293bp的片段。结果表明UvsX、gp32、Bsu DNA polymerase, Large Fragment对于RPA反应都是必需的。当体系中不含UvsY时,可以观察到微弱的条带,说明UvsY可以提高RPA反应的效率。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

用途:RPA法等温扩增;稳定或标记ssDNA;在RT-PCR过程中,增加反转录产物的产量;增强体外DNA的合成;与T4 DNA Polymerase和T4 DNA Ligase一起用于位点特异的突变实验;从含有腐植酸的样本如土壤中扩增细菌或真菌基因组时,可提高PCR产物的产量和特异性(当PCR体系中包含T4 gp32蛋白时(2.5μg/100μl),腐植酸的抑制作用可被降低7倍);促进限制性内切酶的消化反应。

来源:大肠杆菌表达和纯化而得的T4噬菌体基因32的重组蛋白。

纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含核糖核酸酶及磷酸酶。

储存液:20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM NaCl, 0.5mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol。

失活或抑制:65ºC孵育10min。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7057S-1 T4 Gene 32 Protein (10mg/ml) 10µl
D7057S-2 10X T4 Gene 32 Protein Buffer 500µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7057M-1 T4 Gene 32 Protein (10mg/ml) 50µl
D7057M-2 10X T4 Gene 32 Protein Buffer 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7057L-1 T4 Gene 32 Protein (10mg/ml) 200µl
D7057L-2 10X T4 Gene 32 Protein Buffer 8ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存。

注意事项:

配制反应体系时,会出现白色沉淀,属于正常现象,不影响实验结果。

该蛋白的最佳反应温度为37ºC。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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