碧云天生产的T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白)，也称T4 gp32 protein，T4 gp32蛋白或T4噬菌体gp32蛋白，是一种由噬菌体T4基因组的基因32编码的单链DNA (ssDNA)结合蛋白，常用于基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification, RPA)的等温扩增反应等。

T4 Gene 32 Protein为T4噬菌体DNA复制和修复所必需。在T4噬菌体DNA复制过程中，T4 gp32结合并稳定暂时形成的单链DNA区域。在使用电子显微镜观察细胞内DNA结构的时候，该蛋白也被广泛用于稳定和标记单链DNA区域。此外，T4 gp32还被报道可以促进限制性内切酶和T4 DNA聚合酶活性，在RT-PCR过程中提高逆转录酶效率，提高PCR产物产量。

T4 gp32 protein可用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification, RPA)。RPA主要包括以下几个组分：重组酶(Recombinase) T4 UvsX，重组酶载入因子(Recombinase loading factor) T4 UvsY，Bsu DNA聚合酶大片段以及单链DNA结合蛋白(Single-strand binding protein) (如T4 gp32 Protein)等。在ATP参与的情况下，UvsX与引物相结合形成复合物，扫描DNA模板，寻找到与引物配对的核酸序列。一旦引物被定位到了DNA模板的同源序列，可以直接引发链交换反应形成D-Loop结构：ATP水解产生ADP，UvsX被gp32取代而从DNA模板上解离下来，gp32作为单链结合蛋白可以稳定在被置换的DNA链的D-Loop结构中，防止引物解离。UvsX被解离后，引物3'末端暴露并被Bsu DNA聚合酶识别。随后聚合酶与DNA模板配对并进行引物的延伸和模板的扩增。重组酶载入因子T4 UvsY和拥挤试剂(Crowding reagent) Carbowax20M的加入有利于UvsX与引物的结合，即有利于重组酶UvsX的载入。

碧云天T4 gp32 protein在RPA反应中的作用请参考图1。

图1.碧云天T4 gp32 protein (D7057)在RPA反应中的效果图。以pUC18为模板，使用正向引物Primer-F (5'-AGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCC-3')和反向引物Primer-R (5'-TGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACA-3')进行RPA反应。配制50µl反应体系：包含缓冲液, dNTPs, pUC18, Primer-F, Primer-R, UvsX (D7059), UvsY (D7061), 600ng/μl T4 Gene 32 Protein (D7057), Bsu DNA Polymerase, Large Fragment (D7055)。设置无pUC18的阴性对照，以及无UvsX、无UvsY、无gp32和无Bsu DNA polymerase, Large Fragment的对照。配制好反应体系后，最后统一将Mg(Ac)2加到管壁上，离心以启动反应，39ºC孵育30分钟，随后60ºC加热10分钟。反应结束后离心，从每管取出4μl样品，分别加入0.8µl DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析，产物为长度为293bp的片段。结果表明UvsX、gp32、Bsu DNA polymerase, Large Fragment对于RPA反应都是必需的。当体系中不含UvsY时，可以观察到微弱的条带，说明UvsY可以提高RPA反应的效率。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

用途：RPA法等温扩增；稳定或标记ssDNA；在RT-PCR过程中，增加反转录产物的产量；增强体外DNA的合成；与T4 DNA Polymerase和T4 DNA Ligase一起用于位点特异的突变实验；从含有腐植酸的样本如土壤中扩增细菌或真菌基因组时，可提高PCR产物的产量和特异性(当PCR体系中包含T4 gp32蛋白时(2.5μg/100μl)，腐植酸的抑制作用可被降低7倍)；促进限制性内切酶的消化反应。

来源：大肠杆菌表达和纯化而得的T4噬菌体基因32的重组蛋白。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含核糖核酸酶及磷酸酶。

储存液：20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM NaCl, 0.5mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol。

失活或抑制：65ºC孵育10min。

-20ºC保存。

配制反应体系时，会出现白色沉淀，属于正常现象，不影响实验结果。

该蛋白的最佳反应温度为37ºC。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。