T4 DNA Polymerase
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产品编号 D7052S
数量
¥ 133.00
产品包装:
150U 750U 3kU
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碧云天生产的T4 DNA Polymerase,即T4 DNA聚合酶,是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下,催化5'→3'方向的DNA合成。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性,但不具有5'→3'外切酶活性。

T4 DNA Polymerase具有比DNA聚合酶I更强的3'→5'核酸外切酶活性,因此该酶是高保真的DNA聚合酶;与大肠杆菌DNA聚合酶I不同的是,T4 DNA聚合酶不具有5'→3'核酸外切酶活性。

T4 DNA Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性,可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高,即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约上百倍。

碧云天生产的T4 DNA Polymerase催化5'端突出末端补平的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的T4 DNA Polymerase催化5'端突出末端补平的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的T4 DNA Polymerase,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的T4 DNA Polymerase,12℃孵育15min进行反应,反应完毕后冰浴3-5min,75℃孵育20min以终止反应。取5μl反应产物,加入1μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60min,之后用D0130 NA-Red (EB升级换代产品,2000X)室温染色15min,观察实验结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。反应体系(20μl):10mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 125µM dNTP Mix, 0.5µM Template/Primer (Template:5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3';Primer:5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3');Primer和Template按照D0251产品说明书中推荐的程序进行退火反应,之后以Primer/Template退火产物为底物,进行5'端突出末端的补平。

用途:DNA 5'或3'突出末端的平滑化和平端克隆;通过置换反应进行标记DNA探针合成;定点突变过程中第二链的合成;不依赖于连接反应的PCR产物克隆;通过引物延伸法分析mRNA转录的起始点。

来源:T4 DNA聚合酶由大肠杆菌表达纯化而来,表达基因为T4噬菌体基因43。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 37℃.

纯度:不含DNA内切酶,不含RNase。

酶储存液:100mM potassium phosphate (pH6.5), 1mM DTT, 50%甘油。

10X Reaction Buffer: 100mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 500mM NaCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT。

失活或抑制:75℃加热20min可使T4 DNA聚合酶充分失活;金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA聚合酶的活性。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7052S-1 T4 DNA Polymerase (3U/µl) 50µl
D7052S-2 10X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer 300µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7052M-1 T4 DNA Polymerase (3U/µl) 250µl
D7052M-2 10X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer 1.5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7052L-1 T4 DNA Polymerase (3U/µl) 1ml
D7052L-2 10X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer 6ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

由于该酶具有3'→5'核酸外切酶的活性,反应温度的提高、过量酶的使用、没有加入dNTP或反应时间过长都可能造成DNA 3'末端碱基被切除而形成凹端。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.DNA 5'或3'突出末端平滑化。
a.Template/Primer杂合双链的退火:
将单链DNA Template和Primer等摩尔数混合,推荐的终浓度为10µM,90℃孵育1分钟,然后通过梯度降温至25℃退火形成Primer/Template杂交双链。推荐使用碧云天生产的D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),并按照该产品使用说明进行退火反应。退火后形成的双链可以在-20℃保存。
b.参考下表在冰浴上设置如下反应体系:
Reagent Volume Final Concentration
Nuclease-Free Water (16.67-x)µl -
5’ and/or 3’ overhang dsDNA xµl 0.5µM or 0.05µg/µl
T4 DNA Polymerase Reaction Buffer (10X) 2µl 1X
dNTP Mix (2.5mM each) 1µl 125µM
T4 DNA Polymerase (3U/µl) 0.33µl 0.05U/µl
Total Volume 20µl -
注:如果同时进行多个反应,可以把上表中除5’ and/or 3’ overhang dsDNA之外的所有溶液和酶预混合,然后再分装到各反应管。如果是普通的双链DNA末端酶切后的补平和打平,可以使用上表中的推荐酶量;如果是用于较长的DNA片段的合成,推荐把酶量加大约3倍左右。
c.按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
d.反应条件:12℃孵育15分钟或室温(25℃)孵育5分钟。
e.终止反应:75℃孵育20分钟或加入终浓度为10mM的EDTA以终止反应。
2.其他用途请自行参考T4 DNA Polymerase的相关文献资料进行。
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