碧云天生产的E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein，即大肠杆菌单链DNA结合蛋白，也称E.coli SSB、ESSB、Recombinant SSB、重组单链DNA结合蛋白，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种无序列特异性、能以四聚体形式结合到单链DNA的8-16nt核苷酸上，进而保护单链DNA免受核酸酶降解或防止单链DNA重新配对形成二级结构的单链DNA结合蛋白[1]。

ssDNA存在易被DNase降解、易形成二级结构等特点，其不稳定性极大限制了酶促反应的正常进行。E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein是一种不依赖于特异性序列，以四聚体形式发挥功能的单链DNA结合蛋白，能够以高亲和力与单链DNA结合，而不能结合RNA或双链DNA。E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein与ssDNA的结合可稳定与保护单链DNA免被DNase降解或形成二级结构，同时也可使DNA双螺旋不稳定，促使DNA聚合酶与底物结合，进而提高DNA聚合酶的催化活性，改善PCR扩增效率。因此E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein在PCR扩增、DNA测序等方面具有广泛应用。

碧云天生产的E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein结合ssDNA的效果请参考图1。

图1.碧云天E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein (D7024)结合ssDNA的效果图。在10µl反应体系中，加入图中指定量的ssDNA(0-12pmol)及1μg本产品，随后用缓冲液(10mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, pH7.5 @ 25ºC)补齐至10μl，37ºC孵育15分钟进行充分结合。结合过程完成后，取10μl反应后产物，加入1µl EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色, 10X)(GS007)混匀，使用BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶(6%, 15孔) (GS306S)在100V条件下进行电泳检测。电泳结束后，在室温下使用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)对凝胶进行染色20-30分钟，紫外灯下拍照观察实验结果。如图所示，随着ssDNA使用量的增加，所生成的复合物的量也随之增多，且未观察到残留的游离ssDNA，说明本产品可有效与ssDNA结合。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

用途：提高PCR特异性和扩增效率；使用具有连续寡核苷酸的primer walking策略进行DNA测序；在无凝胶毛细管电泳(CE)中用于DNA、RNA和蛋白质的定量分析；杂交产物检测；显示DNA结构；检测核酸酶污染；测定解旋酶活性；DNA测序；荧光偏振分析；协助进行焦磷酸测序中获得更长的读序长度的SNP分析；消除强二级结构单链或双链DNA测序时的停顿现象；定点突变；在体外促进RecA蛋白依赖的同源配对和链交换；提高限制性内切酶消化活性；重组酶聚合酶扩增(RPA)。

来源：纯化自携带编码E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein基因的E.coli重组菌株。

分子量：E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein的分子量约为18.9kDa。

纯度：经SDS-PAGE检测，纯度大于95%；且不含DNase、RNase和磷酸酯酶。

酶活性：Approximately 5µg of SSB protein is required to prevent optical density change of 1µg of single-stranded DNA upon addition of 10mM MgCl2.

储存液：50mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50%(v/v) Glycerol (pH7.5 @ 25ºC).

失活或抑制：65ºC孵育20分钟可使E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein失活。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D7024S	E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein (5µg/µl)	20µl
D7024M	E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein (5µg/µl)	100µl
D7024L	E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein (5µg/µl)	400µl
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，两年有效。

注意事项：

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.首次使用打开管盖前，建议8,000-12,000×g离心约10秒，使附着在管盖或管壁上的液体聚集于管底。
2.E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein可广泛兼容各种PCR、DNA测序、限制性内切酶酶切等常见的分子生物学反应体系，为保护ssDNA不被DNase降解，推荐在反应体系中加入终浓度为0.1μg/μl的E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein。
3.如需在体外初步摸索检测E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein与ssDNA的结合效率，可参考如下步骤进行：
a.在10μl反应体系(10mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, pH7.5 @ 25ºC)中加入一系列不同量的ssDNA及0.2μl (1µg)的E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein。
注1：建议最后添加E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein。
注2：请在冰浴上配制反应体系。
注3：如需摸索或调整E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein的使用量，可配制50mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50%(v/v) Glycerol (pH7.5 @ 25ºC)储存液，并用其对E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein进行稀释后再添加。
注4：ssDNA的用量可按照E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein与ssDNA的摩尔比为4:1左右进行调整和尝试。
注5：最佳ssDNA添加量的参考标准是：在固定E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein使用量不变的情况下，加入ssDNA进行结合反应后所形成的E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein与ssDNA复合物的量最多，且不会出现过量的游离ssDNA时即为最佳使用量。
注6：E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein通常能兼容各种类型的反应缓冲液，可广泛适用于大多数常规的分子生物学反应中。
b.配制好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。
c.反应条件：37ºC孵育15分钟(注意保持恒温，否则会影响ssDNA与E.coli SSB的结合效率)。
注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。
d.取适量反应后产物，按比例加入EMSA上样缓冲液，混合均匀。推荐使用碧云天生产的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色, 10X) (GS006)或EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色, 10X) (GS007)。
e.将反应后产物进行EMSA PAGE凝胶电泳。推荐使用碧云天生产的BeyoGel™ 系列EMSA PAGE预制胶(GS301S/GS302S/ GS305S/GS306S)或EMSA PAGE凝胶配制试剂盒(GS298S)。
注：在正式电泳前，推荐在100V条件下，预电泳30分钟，随后上样并在冰上使用100V电压进行电泳，直至样品中的溴酚蓝电泳至凝胶的2/3位置处时，可停止电泳。
f.使用碧云天的NA-Red(EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)对凝胶进行染色约20-30分钟后，即可在紫外灯下拍照观察，分析E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein与ssDNA的结合效果。
4.其它用途请自行根据实验目的，查阅相关文献资料进行。
参考文献：
1.Shereda RD, Kozlov AG, Lohman TM, Cox MM, Keck JL. 2008. 43(5):289-318.
2.Dubiel K, Henry C, Spenkelink LM, Kozlov AG, Wood EA, et al. 2020. 48(11):6053-6067.
3.Dubiel K, Myers AR, Kozlov AG, Yang O, Zhang J, et al. 2019. 431(2):178-195.
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产品编号	产品名称	包装
D7050S	Bst DNA Polymerase, Large Fragment	800U
D7050M	Bst DNA Polymerase, Large Fragment	4000U
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D7057S	T4 Gene 32 Protein(ssDNA结合蛋白)	100µg
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D7024S	E.coli Single-Stranded DNA Binding Protein (SSB)	100µg
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D7025M	Recombinant E.coli RecA Protein	1mg
P7415-100µg	Recombinant SSB	100µg
P7415-500µg	Recombinant SSB	500µg
D7360S	Uracil-DNA Glycosylase(E. coli)	1000U
D7360M	Uracil-DNA Glycosylase(E. coli)	5000U
D7362S	Uracil-DNA Glycosylase(Heat-labile, Bacterium)	100U
D7362M	Uracil-DNA Glycosylase(Heat-labile, Bacterium)	500U
D7364S	Uracil-DNA Glycosylase(Heat-labile, Cod)	200U
D7364M	Uracil-DNA Glycosylase(Heat-labile, Cod)	1000U
D7364L	Uracil-DNA Glycosylase(Heat-labile, Cod)	5000U