SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的DNA靶标。SgeI限制性内切酶可识别m5CNNG(9/13)^位点,并于37℃下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能,该酶储存缓冲液中包含预混合BSA,其可增强酶的稳定性,并与DNA制剂中可能存在的污染物相结合。
酶活性检测:在1X SgeI Buffer条件下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+)在50μl反应体系中37℃孵育1h,不断增加酶量,直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为1U。
质量控制:(1) 核酸内切酶残留检测:将3U SgeⅠ与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h,通过DNA电泳检测质粒无变化。(2) 核酸外切酶残留检测:将5U SgeⅠ与双链DNA底物在37℃温育1h,通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
SgeI内切酶基本信息如下:
识别序列 | 同裂酶 | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰? |
5'-m5CNNG(N)9^-3' 3'-GNNC(N)13^-5' |
无 | 37℃ | 80℃ 20min | 有时有干扰 |
SgeI内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 总是切割被Dcm甲基转移酶甲基化的DNA | 切割与CpG甲基化序列重叠的靶点 | 无影响 | 无影响 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6847-50μl | SgeI | 50μl |
D6847-1ml | 10X SgeⅠ Buffer | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,两年有效。
注意事项:内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切。
甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI的非特异性酶切,因此,建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。
不含核酸酶的超纯水推荐选购碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Plasmid DNA |
Ultrapure Water | to 20µl |
10X SgeⅠ Buffer | 2µl |
Substrate DNA | xµl (up to 0.5- 2µg) |
SgeI | 0.2-1µl |
Total volume | 20µl |
Incubate at 37℃ | 1h |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6049 | ApaI | 2000U |
D6053 | BamHI | 2000U |
D6093 | BglII | 500U |
D6257 | DpnI | 500U |
D6258 | DpnI | 2500U |
D6329 | EcoRI | 2000U |
D6330 | EcoRI | 5000U |
D6337 | EcoRV | 1500U |
D6389 | HindIII | 2000U |
D6390 | HindIII | 5000U |
D6417 | KpnI | 1000U |
D6449 | MluI | 1000U |
D6481 | NcoI | 200U |
D6485 | NdeI | 400U |
D6489 | NheI | 200U |
D6497 | NotI | 150U |
D6565 | PstI | 1000U |
D6566 | PstI | 3000U |
D6581 | PvuII | 1000U |
D6585 | RsaI | 200U |
D6593 | SacI | 500U |
D6597 | SalI | 1000U |
D6633 | SmaI | 500U |
D6713 | XbaI | 1500U |
D6721 | XhoI | 2000U |
D6847-50μl | SgeI | 50μl |
D5601-200μl | BeyoFast™ ApaLI | 200μl |
D5609-50μl | BeyoFast™ AscI | 50μl |
D5617-25μl | BeyoFast™ AvrII | 25μl |
D5625-500μl | BeyoFast™ BamHI | 500μl |
D5633-125μl | BeyoFast™ BclI | 125μl |
D5641-100μl | BeyoFast™ BglII | 100μl |
D5649-50μl | BeyoFast™ BsaI | 50μl |
D5657-100μl | BeyoFast™ BstBI | 100μl |
D5665-100μl | BeyoFast™ BstEII | 100μl |
D5673-50μl | BeyoFast™ ClaI | 50μl |
D5681-50μl | BeyoFast™ DpnI | 50μl |
D5689-50μl | BeyoFast™ DpnII | 50μl |
D5697-25μl | BeyoFast™ EagI | 25μl |
D5705-600μl | BeyoFast™ EcoRI | 600μl |
D5713-200μl | BeyoFast™ EcoRV | 200μl |
D5721-30μl | BeyoFast™ Esp3I (BsmBI ) | 30μl |
D5729-50μl | BeyoFast™ FspI | 50μl |
D5737-500μl | BeyoFast™ HindIII | 500μl |
D5745-500μl | BeyoFast™ HinfI | 500μl |
D5753-50μl | BeyoFast™ HpaI | 50μl |
D5761-30μl | BeyoFast™ KasI | 30μl |
D5769-200μl | BeyoFast™ KpnI | 200μl |
D5777-100μl | BeyoFast™ MluI | 100μl |
D5785-50μl | BeyoFast™ MnlI | 50μl |
D5793-30μl | BeyoFast™ NcoI | 30μl |
D5801-200μl | BeyoFast™ NdeI | 200μl |
D5809-30μl | BeyoFast™ NheI | 30μl |
D5817-50μl | BeyoFast™ NotI | 50μl |
D5825-50μl | BeyoFast™ NruI | 50μl |
D5833-25μl | BeyoFast™ NsiI | 25μl |
D5841-25μl | BeyoFast™ PacI | 25μl |
D5849-500μl | BeyoFast™ PstI | 500μl |
D5857-200μl | BeyoFast™ PvuII | 200μl |
D5865-100μl | BeyoFast™ SacI | 100μl |
D5873-50μl | BeyoFast™ SacII | 50μl |
D5881-200μl | BeyoFast™ SalI | 200μl |
D5889-25μl | BeyoFast™ SbfI | 25μl |
D5897-100μl | BeyoFast™ SfiI | 100μl |
D5905-100μl | BeyoFast™ SmaI | 100μl |
D5913-50μl | BeyoFast™ SpeI | 50μl |
D5921-50μl | BeyoFast™ SphI | 50μl |
D5929-60μl | BeyoFast™ SspI | 60μl |
D5937-100μl | BeyoFast™ StuI | 100μl |
D5945-200μl | BeyoFast™ TaqI | 200μl |
D5953-500μl | BeyoFast™ XbaI | 500μl |
D5961-500μl | BeyoFast™ XhoI | 500μl |