SgeI
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产品编号 D6847-50μl
数量
¥ 158.00
产品包装:
50μl
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产品问答

SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的DNA靶标。SgeI限制性内切酶可识别m5CNNG(9/13)^位点,并于37℃下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能,该酶储存缓冲液中包含预混合BSA,其可增强酶的稳定性,并与DNA制剂中可能存在的污染物相结合。

酶活性检测:在1X SgeI Buffer条件下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+)在50μl反应体系中37℃孵育1h,不断增加酶量,直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为1U。

质量控制:(1) 核酸内切酶残留检测:将3U SgeⅠ与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h,通过DNA电泳检测质粒无变化。(2) 核酸外切酶残留检测:将5U SgeⅠ与双链DNA底物在37℃温育1h,通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

SgeI内切酶基本信息如下:

识别序列 同裂酶 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
5'-m5CNNG(N)9^-3'
3'-GNNC(N)13^-5'
37℃ 80℃ 20min 有时有干扰

SgeI内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:

Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI
无影响 总是切割被Dcm甲基转移酶甲基化的DNA 切割与CpG甲基化序列重叠的靶点 无影响 无影响
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6847-50μl SgeI 50μl
D6847-1ml 10X SgeⅠ Buffer 1ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切。

甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI的非特异性酶切,因此,建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。

不含核酸酶的超纯水推荐选购碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.单酶切时可以参考如下反应体系,在冰浴上进行操作。
Reagent Plasmid DNA
Ultrapure Water to 20µl
10X SgeⅠ Buffer 2µl
Substrate DNA xµl (up to 0.5- 2µg)
SgeI 0.2-1µl
Total volume 20µl
Incubate at 37℃ 1h
注:反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过1h。
a.参考上表依次加入各种液体后,用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合),然后瞬时离心以沉降液体至管底。
b.37℃温育1h。酶切反应时优先推荐使用水浴,反应温度通常更加恒定一些。
c.80℃温育20min即可使酶失活并停止反应(可选)。
2.双或多酶切时可以在参考上表单酶切反应体系设置的基础上,参考如下原则设置反应体系。
a.每种内切酶的用量为1μl,并根据需要适当扩大反应体系;
b.所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
c.如果所用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先从最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
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