碧云天生产的T4 Endonuclease V (T4 PDG)，简称T4 Endo V，也称T4 pyrimidine dimer glycosylase (T4 PDG)，中文名为T4核酸内切酶V，也称T4嘧啶二聚体糖基化酶，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组内切酶。T4 Endonuclease V来源于T4噬菌体，是一种DNA损伤修复酶，具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。T4 Endonuclease V的N-糖基化酶活性可以识别由紫外辐射等引起的顺式环丁烷嘧啶(cis-syn cyclobutane pyrimidine)二聚体(包括T^T，T^C，C^C)，并且在嘧啶二聚体的5'-糖苷键处进行酶切产生一个脱嘧啶(Apyrimidinic, AP)位点；T4 Endonuclease V的AP裂解酶活性通过β消除作用(β-elimination)切除AP位点，且产生一个具有3'-α,β-不饱和醛和5'-磷酸的碱基缺口(Gap) [1,2]。
本产品识别并切除双链DNA上受损碱基的原理请参考图1。
图1.碧云天T4 Endonuclease V (D6785)识别并切除双链DNA上受损碱基的示意图。T4 Endonuclease V在其N-糖基化酶活性作用下识别并切除双链DNA中由紫外辐射等引起的顺式环丁烷嘧啶二聚体(包括T^T，T^C，C^C)，产生一个AP位点；随后其AP裂解酶活性通过β消除作用切除AP位点，且产生一个具有3'-α,β-不饱和醛和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。
碧云天生产的T4 Endonuclease V催化酶切含AP位点双链DNA的效果请参考图2。
图2.碧云天生产的T4 Endonuclease V (D6785)和国外N公司的同类产品(Competitor)催化切除含AP位点双链DNA效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的T4 Endonuclease V，37ºC孵育30分钟进行损伤位点切除反应，反应完毕后立即放至冰上，并加入DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212 )，随后用BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(15%) (R0243/R0244)进行电泳分析，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：100mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，25mM Na2HPO4，pH 7.2 @ 25ºC，20pmol含AP位点的双链DNA以及不同浓度的T4 Endonuclease V。含AP位点的双链DNA制备方法：将含dU碱基的 31nt单链DNA和正常的与其互补的27nt单链DNA按照Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成双链DNA；随后使用Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)、Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)或Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (D7364)催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶产生含AP位点的双链DNA，最终可以被T4 Endonuclease V所识别和酶切。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
用途：可用于DNA损伤研究；单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis)。
来源：由大肠杆菌表达，经纯化而获得。
活性单位定义：One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the conversion of 0.5µg of UV irradiated supercoiled pUC19 DNA to > 95% nicked plasmid in a total reaction volume of 20µl in 30 minutes at 37ºC. Nicking is assessed by agarose gel electrophoresis. Irradiated plasmid contains an average of 3-5 pyrimidine dimers.
纯度：大于95%，无其自身之外的DNA内切酶活性和外切酶活性，无RNA酶活性。
酶储存溶液：10mM Tris-HCl (pH7.4 @ 25ºC), 250mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol，0.15% Triton X-100.
失活或抑制：65ºC 10分钟。
10X T4 Endonuclease V Buffer: 250mM Na2HPO4 (pH7.2 @ 25ºC), 1M NaCl, 10mM EDTA,10mM DTT.
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6785S-1 | T4 Endonuclease V (10U/µl) | 100µl |
| D6785S-2 | 10X T4 Endonuclease V Buffer | 0.4ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6785M-1 | T4 Endonuclease V (10U/µl) | 500µl |
| D6785M-2 | 10X T4 Endonuclease V Buffer | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6785L-1 | T4 Endonuclease V (10U/µl) | 2ml |
| D6785L-2 | 10X T4 Endonuclease V Buffer | 8ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，至少两年有效。
注意事项：本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Component | Volume |
| Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 15µl |
| 10X T4 Endonuclease V Buffer | 2µl |
| dsDNA with AP site (10µM/µl) | 2µl |
| T4 Endonuclease V (10U/µl) | 1µl |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D0251 | Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) | 1ml |
| D6781S | Endonuclease VIII | 1KU |
| D6781M | Endonuclease VIII | 5KU |
| D6781L | Endonuclease VIII | 20KU |
| D6783S | Endonuclease IV | 500U |
| D6783M | Endonuclease IV | 2kU |
| D6783L | Endonuclease IV | 10kU |
| D6785S | T4 Endonuclease V | 1kU |
| D6785M | T4 Endonuclease V | 5kU |
| D6785L | T4 Endonuclease V | 20kU |
| D7359-250μl | dUTP (100mM) | 250μl |
| D7359-1ml | dUTP (100mM) | 1ml |
| D7360S | Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) | 1000U |
| D7360M | Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) | 5000U |
| D7362S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 100U |
| D7362M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 500U |
| D7364S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 200U |
| D7364M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 1000U |
| D7364L | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 5000U |
| R0215-1ml | 2X RNA Loading Buffer | 1ml |
| ST876-100ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 100ml |
| ST876-500ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 500ml |
