Endonuclease VIII
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产品编号 D6781L
数量
¥ 3398.00
产品包装:
1KU 5KU 20KU
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碧云天生产的Endonuclease VIII,即核酸内切酶VIII,来自大肠杆菌,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组内切酶。Endonuclease VIII是一种DNA损伤修复酶,具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。Endonuclease VIII的N-糖基化酶活性能切下并释放双链DNA上受损的嘧啶碱基(Pyrimidines)从而产生一个脱嘌呤(Apurinic, AP)位点;Endonuclease VIII的AP裂解酶活性,可以切割AP位点的3'和5'端,从而切除AP位点,产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。

可以被Endonuclease VIII识别并切除的受损碱基包括:Urea、5,6-dihydroxythymine (5,6-二羟基胸腺嘧啶)、Thymine glycol (胸腺嘧啶乙二醇)、5-hydroxy-5-methylhydantoin (5-羟基-5-甲内酰脲)、Uracil glycol (尿嘧啶乙二醇)、6-hydroxy-5,6-dihydrothymine (6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶)和Methyltartronylurea (甲基羟丙二酰脲) [1,2]。虽然Endonuclease VIII与Endonuclease III相似,但Endonuclease VIII具有β和δ裂解酶活性,而Endonuclease III仅具有β裂解酶活性。

本产品识别并切除双链DNA上受损碱基的原理请参考图1。

图1. Endonuclease VIII识别并切除双链DNA上受损碱基的示意图。Endonuclease VIII识别双链DNA上受损碱基并在其N-糖基化酶活性作用下切除双链DNA上受损的嘧啶碱基,产生一个脱嘌呤(AP)位点;随后在其AP裂解酶活性作用下切割AP位点的3'和5'端切除AP位点,产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口。

碧云天生产的Endonuclease VIII催化酶切含AP位点双链DNA的效果请参考图2。

图2. 碧云天生产的Endonuclease VIII (D6781)和国外N公司的同类产品(Competitor)催化切除含AP位点双链DNA的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Endonuclease VIII,37℃孵育30分钟进行损伤位点切除反应,反应完毕后立即放至冰上,并加入2X RNA Loading Buffer (R0215),随后用BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(15%) (R0243/R0244)进行电泳分析,最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。反应体系(20μl):10mM Tris-HCl, 75mM NaCl, 1mM EDTA, pH 8 @ 25℃, 20pmol含AP位点的双链DNA以及不同浓度的Endonuclease VIII。含AP位点的双链DNA的制备方法:将含dU碱基的DNA 1 (31nt)和正常的DNA 2 (27nt)按照Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成双链DNA;随后使用Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)/Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)/Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (D7364)催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解,从而释放游离尿嘧啶产生含AP位点的双链DNA。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

用途:可用于DNA损伤和修复研究;单细胞凝胶电泳;碱洗脱;碱解螺旋;识别并切除双链DNA上受损的嘧啶碱基;切割AP位点的3'和5'端而产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。

来源:由大肠杆菌表达纯化而获得。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave 1pmol of a 34 mer oligonucleotide duplex containing a single AP site in a total reaction volume of 10μl in 1 hour at 37℃ in 1X Endonuclease VIII Reaction Buffer containing 10pmol of fluorescently labeled oligonucleotide duplex.

纯度:大于95%,无DNA内切酶和其他外切酶活性,无RNA酶活性。

酶储存溶液:10mM Tris-HCl (pH8 @ 25℃), 250mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol.

失活或抑制:75℃加热10分钟可使Endonuclease VIII失活。

10X Endonuclease VIII Buffer:100mM Tris-HCl, 750mM NaCl, 10mM EDTA, pH 8 @ 25℃.

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6781S-1 Endonuclease VIII (10U/µl) 100µl
D6781S-2 10X Endonuclease VIII Buffer 0.4ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6781M-1 Endonuclease VIII (10U/µl) 500µl
D6781M-2 10X Endonuclease VIII Buffer 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6781L-1 Endonuclease VIII (10U/µl) 2ml
D6781L-2 10X Endonuclease VIII Buffer 8ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少两年有效。

注意事项:

本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.使用Endonuclease VIII切除双链DNA中的AP位点。
a.双链DNA的制备:使用碧云天Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)使单链DNA (中间含有一个或多个脱氧尿嘧啶碱基)和其互补链DNA (中间不含有脱氧尿嘧啶碱基)退火形成双链DNA。
b.含AP位点双链DNA的制备:使用碧云天Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)/Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)/Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile,Cod) (D7364)处理退火双链DNA,生成含有AP位点的双链DNA。
c.切除双链DNA中的含AP位点的:
(a)参考下表在冰浴中配制反应体系。
Component Volume
Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 15µl
10X Endonuclease VIII Buffer 2µl
dsDNA with AP site (10µM/µl) 2µl
Endonuclease VIII (10U/µl) 1µl
注:请把除Endonuclease VIII以外的组分充分混匀后再加入Endonuclease VIII,加入Endonuclease VIII后可以用移液器吹打混匀。如果待酶切DNA量较大,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
(b)反应条件:37℃,30分钟。
(c)终止反应:75℃加热10分钟,或者冰浴孵育1-2分钟并加入2X RNA Loading Buffer (R0215)
2.其它应用请参考相关文献进行。
参考文献:
1.Dizdaroglu M, Laval J, Boiteux S. Biochemistry. 1993. 32(45):12105-12111.
2.Hatahet Z, Kow YW, Purmal AA, Cunningham RP, Wallace SS. J Biol Chem. 1994. 269(29):18814-18820.
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D7362M Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) 500U
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