碧云天自主研发生产的SgeI，是从大肠杆菌表达纯化获得的一种修饰依赖型限制性内切酶，其基本信息如下：
| 识别序列[1] | 缓冲液兼容性(%) | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰？ | ||||||
| 5'-m5CNNG(N)9^-3' | 1X SgeI | 1X B | 1X G | 1X O | 1X R | 1X Y | 2X Y | 37ºC | 65ºC 20min |
有时有干扰 |
| 3'-GNNC(N)13^-5' | 100 | 0-20 | 0-20 | 0-20 | NR* | NR* | NR* | |||
*，Star activity，当酶量3倍或以上过量时会产生星号活性，即产生非特异性酶活性。
NR，不推荐使用这种缓冲液，会产生很高的星号活性。
SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的DNA靶标。SgeI限制性内切酶可识别m5CNNG(9/13)^位点，并于37ºC下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能，该酶稀释液中包含预混合BSA，其可增强酶的稳定性，并与DNA制剂中可能存在的污染物相结合。
碧云天生产的SgeI酶切DNA双链的效果请参考图1。
图1. 碧云天生产的SgeI (D6619)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外T公司的SgeI，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外T公司的SgeI，在1X SgeI Buffer中酶切400ng含6个SgeI位点的pBR322质粒(D2301) (Dcm+)，37ºC孵育1小时进行酶切反应，酶切产物为多个长度不相等的DNA片段，随后65ºC孵育20分钟进行失活，然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与T公司的产品相比，具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
酶储存液组成为：10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 100mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% Glycerol.
酶稀释液组成为：10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 100mM KCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 0.2mg/ml BSA, 50% Glycerol.
1X SgeI Buffer组成为：10mM Tris-HCl (pH8.0 at 25ºC), 5mM MgCl2, 100mM KCl, 0.02% Triton X-100, 0.1mg/ml BSA.
酶性单位定义：One unit is defined as the amount of SgeI required to digest 1µg of pBR322 DNA isolated from E.coli Dcm+ strain in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.
质量控制：(1) 核酸内切酶残留检测：将3U SgeI与超螺旋质粒DNA在37ºC温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。(2) 核酸外切酶残留检测：将3U SgeI与双链DNA底物在37ºC温育1h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
SgeI内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表：
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
| 无影响 | 总是切割被Dcm甲基转移酶甲基化的DNA | 切割与CpG甲基化序列重叠的靶点 | 无影响 | 无影响 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6619S-1 | SgeI (3U/µl) | 85μl |
| D6619S-2 | 10X SgeI Buffer | 340μl |
| － | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6619M-1 | SgeI (3U/µl) | 335μl |
| D6619M-2 | 10X SgeI Buffer | 1.34ml |
| － | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6619L-1 | SgeI (3U/µl) | 1.67ml |
| D6619L-2 | 10X SgeI Buffer | 6.68ml |
| － | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，至少两年有效。
注意事项：内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切。
甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI的非特异性酶切，因此，建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。
长时间酶切不稳定，具有星形活性，建议酶切时优化SgeI酶切时间。
不含核酸酶的超纯水推荐选购碧云天的BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
如果发现预期的酶切位点不能切开，请确认是否存在甲基化干扰问题。
同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性，遇到可能存在甲基化干扰问题时，可以尝试同裂酶。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Plasmid DNA |
| Ultrapure Water | to 20µl |
| 10X SgeI Buffer | 2µl |
| Substrate DNA | xµl (up to 0.5-2µg) |
| SgeI | 0.2-1µl |
| Total volume | 20µl |
| Incubate at 37ºC for 1h | |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6049 | ApaI | 2000U |
| D6050 | AscI | 400U/2kU/10kU/50kU |
| D6052 | AvrII | 200U/1kU/5kU |
| D6053 | BamHI | 2000U |
| D6055 | BamHI | 10/40/200/800kU |
| D6093 | BglII | 500U |
| D6095 | BglII | 2/10/40/200kU |
| D6128 | BsaI | 1/5/20/200kU |
| D6132 | BspQI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6133 | Nt.BspQI | 500U/2kU/10kU |
| D6176 | Cfr9I | 2/10/40kU |
| D6257 | DpnI | 500U/2.5KU/10KU/50KU |
| D6266 | DpnII | 500U/2kU/10kU |
| D6272 | DraI | 4/20/100kU |
| D6292 | EarI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6329 | EcoRI | 2000U |
| D6330 | EcoRI | 5000U |
| D6333 | EcoRI | 10/40/200/800kU |
| D6337 | EcoRV | 1500U |
| D6339 | EcoRV | 4/20/100/400kU |
| D6369 | HhaI | 1/5/20/100kU |
| D6389 | HindIII | 2000U |
| D6390 | HindIII | 5000U |
| D6392 | HindIII | 10/40/200/1000kU |
| D6403 | HpaII | 1/5/20kU |
| D6417 | KpnI | 1000U |
| D6418 | KpnI | 4/20kU |
| D6436 | MboI | 200U/1kU/5kU |
| D6449 | MluI | 1000U |
| D6468 | MseI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6470 | MspI | 4/20/100/500kU |
| D6472 | MspJI | 200U/1kU/5kU |
| D6481 | NcoI | 200U |
| D6482 | NcoI | 800U/4kU/20kU/100kU |
| D6485 | NdeI | 400U |
| D6486 | NdeI | 4/20/100kU |
| D6489 | NheI | 200U |
| D6490 | NheI | 800U/4kU/20kU/100kU |
| D6497 | NotI | 150U |
| D6498 | NotI | 1/4/20/100kU |
| D6538 | PleI | 500U/2Ku/10kU |
| D6542 | PmeI | 800U/4kU/20kU/100kU |
| D6565 | PstI | 1000U |
| D6566 | PstI | 3000U |
| D6568 | PstI | 4/20/100kU |
| D6581 | PvuII | 1000U |
| D6585 | RsaI | 200U |
| D6590 | SapI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6593 | SacI | 500U |
| D6597 | SalI | 1000U |
| D6598 | SalI | 2/10/40/200kU |
| D6607 | ScaI | 2/10/40/200kU |
| D6619 | SgeI | 250U/1Ku/5kU |
| D6633 | SmaI | 500U |
| D6635 | SmaI | 2/10/40/200kU |
| D6652 | SphI | 500U/2Ku/10kU |
| D6713 | XbaI | 1500U |
| D6715 | XbaI | 10/40/200kU |
| D6718 | XcmI | 1/4/20/100kU |
| D6721 | XhoI | 2000U |
| D6723 | XhoI | 2/10/40/200kU |
| D6730 | XmaI | 2/10/40kU |
| D6847-50μl | SgeI | 50μl |
