碧云天自主研发生产的MspJI，是从大肠杆菌表达纯化获得的一种修饰依赖型限制性内切酶，其基本信息如下：
| 识别序列[1] | 缓冲液兼容性(%) | 酶切 温度 |
失活 条件 |
甲基化干扰？ | ||||||
| 5'-mCNNR(N)9^-3' | 1X CutEZ™ | 1X B | 1X G | 1X O | 1X R | 1X Y | 2X Y | 37ºC | 65ºC 20min |
无 |
| 3'-GNNY(N)13^-5' | 100 | 0-10 | 0-10 | 0-10 | 0-10 | 50-100 | 0-10 | |||
MspJI可识别双链DNA上含有C5-甲基化胞嘧啶(5-mC)或C5-羟甲基化胞嘧啶(5-hmC)修饰的mCNNR序列位点，并在甲基化修饰的胞嘧啶3'一侧N9/N13处酶切双链DNA。MspJI也可以识别和酶切一部分含甲基化胞嘧啶修饰的CpG或CHG位点。在这部分完全甲基化胞嘧啶修饰的CpG或CHG位点处，MspJI单独识别每个半甲基化位点并进行双向酶切，分别生成32bp或31bp的含甲基化胞嘧啶位点且5'末端具有4个碱基突出末端的DNA片段。此外，一般情况下MspJI不会对未甲基化胞嘧啶修饰的DNA进行酶切。MspJI识别和酶切位点请参考图1。
图1. MspJI识别和酶切位点。
MspJI配有酶激活剂(30X Enzyme Activator Solution)，可用于高效酶切。
碧云天MspJI酶切DNA双链的效果请参考图2。
图2. 碧云天生产的MspJI (D6472)和同类产品(Competitor)酶活性检测效果图。使用本产品或国外N公司的MspJI，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的MspJI，在1X CutEZ™ Buffer和1X Enzyme Activator Solution中酶切100ng含6个MspJI酶切位点的pBR322质粒(D2301) (Dcm+)，37ºC孵育30分钟进行酶切反应，酶切产物为多个DNA片段，随后65ºC孵育20分钟进行失活，然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
酶储存液组成为：10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 300mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 500μg/ml BSA and 50% Glycerol.
1X CutEZ™ Buffer组成为：50mM Potassium acetate (pH7.9 at 25ºC), 20mM Tris-acetate, 10mM Magnesium acetate, 100μg/ml BSA.
酶切和连接效率：50倍过量的本内切酶消化1小时，>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。
活性单位定义：One unit is defined as the amount of MspJI required to digest 1µg of pBR322 DNA isolated from E.coli Dcm+ strain in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6472S-1 | MspJI (5U/µl) | 40µl |
| D6472S-2 | 30X Enzyme Activator Solution (30µM) | 40µl |
| D6018-160μl | 10X CutEZ™ Buffer | 160µl |
| － | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6472M-1 | MspJI (5U/µl) | 200µl |
| D6472M-2 | 30X Enzyme Activator Solution (30µM) | 200µl |
| D6018-800μl | 10X CutEZ™ Buffer | 800µl |
| － | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6472L-1 | MspJI (5U/µl) | 1ml |
| D6472L-2 | 30X Enzyme Activator Solution (30µM) | 1ml |
| D6018-4ml | 10X CutEZ™ Buffer | 4ml |
| － | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，至少两年有效。
注意事项：内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
MspJI配有酶激活剂(30X Enzyme Activator Solution)，可用于高效酶切。
酶超量会抑制酶切反应，建议优化每种底物DNA进行完全酶切所需要的酶量。
特别注意：延长酶切时间、甘油含量大于5%，低盐浓度，酶激活剂浓度过高，pH>8.0或酶超量(约20倍以上)等可能会导致星号活性，即产生非特异性酶切，包括非甲基化DNA底物的酶切。建议优化每种底物DNA进行完全酶切所需要的酶量，以避免产生星号活性，确保酶切反应的高效和专一。
MspJI对CpG、Dcm或Dam甲基化均不敏感。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Volume |
| Ultrapure water | (17.33-x-y)µl |
| DNA Substrate | xµl (≤1µg) |
| 10X CutEZ™ Buffer | 2µl |
| 30X Enzyme Activator Solution | 0.67µl |
| MspJI | yµl (0.5-1µl) |
| Total volume | 20µl |
| Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight | |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D6049 | ApaI | 2000U |
| D6050 | AscI | 400U/2kU/10kU/50kU |
| D6052 | AvrII | 200U/1kU/5kU |
| D6053 | BamHI | 2000U |
| D6055 | BamHI | 10/40/200/800kU |
| D6093 | BglII | 500U |
| D6095 | BglII | 2/10/40/200kU |
| D6128 | BsaI | 1/5/20/200kU |
| D6132 | BspQI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6133 | Nt.BspQI | 500U/2kU/10kU |
| D6176 | Cfr9I | 2/10/40kU |
| D6257 | DpnI | 500U/2.5KU/10KU/50KU |
| D6266 | DpnII | 500U/2kU/10kU |
| D6272 | DraI | 4/20/100kU |
| D6292 | EarI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6329 | EcoRI | 2000U |
| D6330 | EcoRI | 5000U |
| D6333 | EcoRI | 10/40/200/800kU |
| D6337 | EcoRV | 1500U |
| D6339 | EcoRV | 4/20/100/400kU |
| D6369 | HhaI | 1/5/20/100kU |
| D6389 | HindIII | 2000U |
| D6390 | HindIII | 5000U |
| D6392 | HindIII | 10/40/200/1000kU |
| D6403 | HpaII | 1/5/20kU |
| D6417 | KpnI | 1000U |
| D6418 | KpnI | 4/20kU |
| D6436 | MboI | 200U/1kU/5kU |
| D6449 | MluI | 1000U |
| D6468 | MseI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6470 | MspI | 4/20/100/500kU |
| D6472 | MspJI | 200U/1kU/5kU |
| D6481 | NcoI | 200U |
| D6482 | NcoI | 800U/4kU/20kU/100kU |
| D6485 | NdeI | 400U |
| D6486 | NdeI | 4/20/100kU |
| D6489 | NheI | 200U |
| D6490 | NheI | 800U/4kU/20kU/100kU |
| D6497 | NotI | 150U |
| D6498 | NotI | 1/4/20/100kU |
| D6538 | PleI | 500U/2Ku/10kU |
| D6542 | PmeI | 800U/4kU/20kU/100kU |
| D6565 | PstI | 1000U |
| D6566 | PstI | 3000U |
| D6568 | PstI | 4/20/100kU |
| D6581 | PvuII | 1000U |
| D6585 | RsaI | 200U |
| D6590 | SapI | 400U/2kU/10kU/40kU |
| D6593 | SacI | 500U |
| D6597 | SalI | 1000U |
| D6598 | SalI | 2/10/40/200kU |
| D6607 | ScaI | 2/10/40/200kU |
| D6619 | SgeI | 250U/1Ku/5kU |
| D6633 | SmaI | 500U |
| D6635 | SmaI | 2/10/40/200kU |
| D6652 | SphI | 500U/2Ku/10kU |
| D6713 | XbaI | 1500U |
| D6715 | XbaI | 10/40/200kU |
| D6718 | XcmI | 1/4/20/100kU |
| D6721 | XhoI | 2000U |
| D6723 | XhoI | 2/10/40/200kU |
| D6730 | XmaI | 2/10/40kU |
| D6847-50μl | SgeI | 50μl |
