EcoRI
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产品编号 D6333XL
数量
¥ 6398.00
产品包装:
10kU 40kU 200kU 800kU
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碧云天自主研发生产的EcoRI,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1],是FunII的同裂酶(Isoschizomers),其基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
G^AATTC 1X EcoRI 1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37ºC 65ºC
20min
有时有干扰
CTTAA^G 100 0-20 NR 100 100* NR 100

*,Star activity,当酶量5倍或以上过量时会产生星号活性,即产生非特异性酶活性。

NR,不推荐使用这种缓冲液,会产生很高的星号活性。

碧云天生产的EcoRI酶切DNA双链的效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的EcoRI (D6333)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的EcoRI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的EcoRI,在1X Buffer Y中酶切含一个EcoRI位点的300bp的DNA片段,37ºC孵育1小时进行酶切反应,酶切产物为两个长度相等的150bp片段,随后65ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

酶储存液组成为:10mM Potassium phosphate (pH7.0 at 25ºC), 300mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol, 0.15% Triton X-100。

1X Buffer EcoRI组成为:50mM Tris-HCl (pH7.5 at 37℃),10mM MgCl2,100mM NaCl,0.02% Triton X-100,0.1mg/ml BSA。

1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,0.1mg/ml BSA。

酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,> 95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of EcoRI required to digest 1µg of λDNA in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6333S-1 EcoRI (20U/µl) 500µl
D6333S-2 10X Buffer EcoRI 2ml
D6010Y-2ml 10X Buffer Y 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6333M-1 EcoRI (20U/µl) 2ml
D6333M-2 10X Buffer EcoRI 8ml
D6010Y-8ml 10X Buffer Y 8ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6333L-1 EcoRI (400U/µl) 500µl
D6333L-2 10X Buffer EcoRI 40ml
D6010Y-40ml 10X Buffer Y 40ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6333XL-1 EcoRI (400U/µl) 2ml
D6333XL-2 10X Buffer EcoRI 160ml
D6010Y-160ml 10X Buffer Y 160ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

特别注意:甘油含量大于5%,低盐浓度,pH >8.0或酶大大过量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:
Reagent Volume
DNA Substrate xµl (≤1µg)
Ultrapure water (18-x-y)µl
10X Buffer EcoRI 2µl
EcoRI (20U/µl) yµl (0.5-1µl)
Total volume 20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight
注:请把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
参考文献:
1. Cheng SC, Kim R, King K, Kim SH, Modrich P. J Biol Chem. 1984. 259(18):11571-5.
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D6418S/M KpnI 4kU/20kU
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