Cfr9I
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产品编号 D6176L
数量
¥ 1998.00
产品包装:
2kU 10kU 40kU
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产品问答

碧云天自主研发生产的Cfr9I,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1][2],是XmaI、TspMI和SmaI的同裂酶(Isoschizomers),其基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
C^CCGGG 1X Cfr9I 1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37ºC 65ºC 20min 有时有干扰
GGGCC^C 100 0-20 0-20 0-20 0-20 20-50 0-20

碧云天生产的Cfr9I酶切DNA双链的效果请参考图1。

图1.碧云天Cfr9I (D6176)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外T公司的Cfr9I,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外T公司的Cfr9I,在1X Buffer Y中酶切含一个Cfr9I位点的300bp的DNA片段,37ºC孵育1小时进行酶切反应,酶切产物为两个长度相等的150bp片段,随后65ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与T公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

酶储存液组成为:10mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25ºC), 250mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.2mg/ml BSA, 50% glycerol。

1X Buffer Cfr9I组成为:10mM Tris-HCl (pH 7.2), 5mM MgCl2, 200mM Sodium glutamate, 0.1mg/mL BSA。

1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37ºC), 10mM Magnesium acetate, 66mM Potassium acetate, 0.1mg/ml BSA。

酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,> 95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of Cfr9I required to digest 1µg of λDNA-HindIII fragments in 1 hour at 37ºC in 50 µl of recommended reaction buffer (containing 2µg DNA fragments).

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6176S-1 Cfr9I (20U/µl) 100µl
D6176S-2 10X Buffer Cfr9I 400µl
D6010Y-400µl 10X Buffer Y 400µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6176M-1 Cfr9I (20U/µl) 500µl
D6176M-2 10X Buffer Cfr9I 2ml
D6010Y-2ml 10X Buffer Y 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6176L-1 Cfr9I (20U/µl) 2ml
D6176L-2 10X Buffer Cfr9I 8ml
D6010Y-8ml 10X Buffer Y 8ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

特别注意:甘油含量大于5%,低盐浓度,pH > 8.0或酶超量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.单酶切时可以参考如下反应体系进行:
Reagent Volume
DNA Substrate xµl (≤1µg)
Ultrapure water (18-x-y)µl
10X Buffer Y 2µl
Cfr9I yµl (0.5-1µl)
Total volume 20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight
注:请把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。按照以上体系酶切质粒,会有少量切刻状态的质粒酶切不完全。为使用Cfr9I实现底物的完全酶切,反应体系中的DNA浓度不得低于50µg/ml。
2.双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3.10X Buffer Cfr9I为Cfr9I的专用酶切缓冲液,当酶切的缓冲液为Buffer Cfr9I时,电泳条带弥散。若需要进行胶回收等后续实验,推荐使用10X Buffer Y进行酶切反应。
参考文献:
1.Siksnys V, Pleckaityte M. Eur J Biochem. 1993 . 217(1):411-9.
2.Lubys A, Menkevicius S, Timinskas A, Butkus V, Janulaitis A. Gene. 1994. 141(1):85-9.
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D6132S/M/L/XL BspQI 400U/2kU/10kU/40kU
D6176S/M/L Cfr9I 2/10/40kU
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