碧云天自主研发生产的Cfr9I，是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1][2]，是XmaI、TspMI和SmaI的同裂酶(Isoschizomers)，其基本信息如下：

识别序列	缓冲液兼容性(%)							酶切温度	失活条件	甲基化干扰？
C^CCGGG	1X Cfr9I	1X B	1X G	1X O	1X R	1X Y	2X Y	37ºC	65ºC 20min	有时有干扰
GGGCC^C	100	0-20	0-20	0-20	0-20	20-50	0-20

碧云天生产的Cfr9I酶切DNA双链的效果请参考图1。

图1.碧云天Cfr9I (D6176)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外T公司的Cfr9I，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外T公司的Cfr9I，在1X Buffer Y中酶切含一个Cfr9I位点的300bp的DNA片段，37ºC孵育1小时进行酶切反应，酶切产物为两个长度相等的150bp片段，随后65ºC孵育20分钟使酶失活，然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与T公司的产品相比，具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

酶储存液组成为：10mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25ºC), 250mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.2mg/ml BSA, 50% glycerol。

1X Buffer Cfr9I组成为：10mM Tris-HCl (pH 7.2), 5mM MgCl2, 200mM Sodium glutamate, 0.1mg/mL BSA。

1X Buffer Y组成为：33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37ºC), 10mM Magnesium acetate, 66mM Potassium acetate, 0.1mg/ml BSA。

酶切和连接效率：50倍过量的本内切酶消化1小时，> 95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。

活性单位定义：One unit is defined as the amount of Cfr9I required to digest 1µg of λDNA-HindIII fragments in 1 hour at 37ºC in 50 µl of recommended reaction buffer (containing 2µg DNA fragments).

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D6176S-1	Cfr9I (20U/µl)	100µl
D6176S-2	10X Buffer Cfr9I	400µl
D6010Y-400µl	10X Buffer Y	400µl
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D6176M-1	Cfr9I (20U/µl)	500µl
D6176M-2	10X Buffer Cfr9I	2ml
D6010Y-2ml	10X Buffer Y	2ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D6176L-1	Cfr9I (20U/µl)	2ml
D6176L-2	10X Buffer Cfr9I	8ml
D6010Y-8ml	10X Buffer Y	8ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，至少两年有效。

注意事项：

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开，请确认是否存在甲基化干扰问题。

特别注意：甘油含量大于5%，低盐浓度，pH > 8.0或酶超量(约20倍以上)可能会导致星号活性，即产生非特异性酶切。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.单酶切时可以参考如下反应体系进行：

Reagent	Volume
DNA Substrate	xµl (≤1µg)
Ultrapure water	(18-x-y)µl
10X Buffer Y	2µl
Cfr9I	yµl (0.5-1µl)
Total volume	20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight

注：请把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶，加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够，但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时，可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。按照以上体系酶切质粒，会有少量切刻状态的质粒酶切不完全。为使用Cfr9I实现底物的完全酶切，反应体系中的DNA浓度不得低于50µg/ml。
2.双酶切或多酶切时，需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液，然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3.10X Buffer Cfr9I为Cfr9I的专用酶切缓冲液，当酶切的缓冲液为Buffer Cfr9I时，电泳条带弥散。若需要进行胶回收等后续实验，推荐使用10X Buffer Y进行酶切反应。
参考文献：
1.Siksnys V, Pleckaityte M. Eur J Biochem. 1993 . 217(1):411-9.
2.Lubys A, Menkevicius S, Timinskas A, Butkus V, Janulaitis A. Gene. 1994. 141(1):85-9.
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产品编号	产品名称	包装
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D5809-30μl	BeyoFast™ NheI	30μl
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D5825-50μl	BeyoFast™ NruI	50μl
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D5961-500μl	BeyoFast™ XhoI	500μl
D5966-100μl	BeyoFast™ XmaI	100μl
D6055S/M/L/XL	BamHI	10/40/200/800kU
D6095S/M/L/XL	BglII	2/10/40/200kU
D6128S/M/L/XL	BsaI	1/5/20/200kU
D6132S/M/L/XL	BspQI	400U/2kU/10kU/40kU
D6176S/M/L	Cfr9I	2/10/40kU
D6257S/M/L/XL	DpnI	500U/2.5KU/10KU/50KU
D6272S/M/L	DraI	4/20/100kU
D6292S/M/L/XL	EarI	400U/2kU/10kU/40kU
D6333S/M/L/XL	EcoRI	10/40/200/800kU
D6339S/M/L/XL	EcoRV	4/20/100/400kU
D6392S/M/L/XL	HindIII	10/40/200/1000kU
D6418S/M	KpnI	4/20kU
D6470S/M/L/XL	MspI	4/20/100/500kU
D6482S/M/L/XL	NcoI	800U/4kU/20kU/100kU
D6486S/M/L	NdeI	4/20/100kU
D6490S/M/L/XL	NheI	800U/4kU/20kU/100kU
D6498S/M/L/XL	NotI	1/4/20/100kU
D6542S/M/L/XL	PmeI	800U/4kU/20kU/100kU
D6590S/M/L/XL	SapI	400U/2kU/10kU/40kU
D6607S/M/L/XL	ScaI	2/10/40/200kU
D6635S/M/L/XL	SmaI	2/10/40/200kU
D6715S/M/L	XbaI	10/40/200kU
D6718S/M/L/XL	XcmI	1/4/20/100kU
D6723S/M/L/XL	XhoI	2/10/40/200kU
D6730S/M/L	XmaI	2/10/40kU