碧云天生产的BsaI是一种IIS类限制性内切酶,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组内切酶,常用于Golden Gate组装(Golden Gate Assembly)以及mRNA疫苗用质粒的线性化或其它体外转录质粒的线性化。
BsaI限制性内切酶的基本信息如下:
识别序列 | 缓冲液兼容性(%) | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰? | ||||||
5'-GGTCTC(N)1^-3' | 1X BsaI | 1X B | 1X G | 1X O | 1X R | 1X Y | 2X Y | 37℃* | 80℃ 20min | 是 |
3'-CCAGAG(N)5^-5' | 100 | 25-100 | 50-100 | 75-100 | 100 | 100 | 100 |
*,37℃孵育3h未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性。
碧云天生产的BsaI切割含有其酶切位点的DNA片段的效果请参考图1。
图1. 碧云天生产的BsaI (D6128)和N公司的同类产品(Competitor BsaI)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的BsaI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的BsaI,37℃孵育30分钟进行酶切反应,然后电泳分析,最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。反应体系(20μl): 50mM Potassium Acetate, 20mM Tris-acetate (pH 7.9 @ 25℃), 10mM Magnesium Acetate, 100µg/ml BSA,100ng dsDNA以及1µl不同浓度的BsaI。图中DNA底物的制备方法:以pUC18 (D2303)为模板,用引物5'-AACTTGGTCTGACAGTTA-3'和5'-ATTAACTGGCGAACTAC-3'进行扩增获得含一个BsaI位点的300bp DNA片段。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
酶储存液:10mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol, pH 7.4 @ 25℃.
1X Buffer BsaI:50mM Potassium Acetate, 20mM Tris-acetate, 10mM Magnesium Acetate, 100µg/ml BSA, pH 7.9 @ 25℃.
1X Buffer R:10mM Tris-HCl (pH8.5 @ 37℃), 10mM MgCl2, 100mM KCl, 0.1mg/ml BSA.
酶切和连接效率:20倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。
活性单位定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1µg of pXba DNA in 1 hour at 37℃ in a total reaction volume of 50µl.
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6128S-1 | BsaI (20U/µl) | 50µl |
D6128S-2 | 10X Buffer BsaI | 0.2ml |
D6128S-3 | 10X Buffer R | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6128M-1 | BsaI (20U/µl) | 250µl |
D6128M-2 | 10X Buffer BsaI | 1ml |
D6128M-3 | 10X Buffer R | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6128L-1 | BsaI (200U/µl) | 100µl |
D6128L-2 | 10X Buffer BsaI | 4ml |
D6128L-3 | 10X Buffer R | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6128XL-1 | BsaI (200U/µl) | 1ml |
D6128XL-2 | 10X Buffer BsaI | 40ml |
D6128XL-3 | 10X Buffer R | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
温度在50℃时酶切活性可达100%。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。Dcm甲基化与酶切位点的重叠组合会阻断酶切,CpG甲基化与酶切位点的重叠组合也会阻断酶切。
甘油含量大于5%可能会导致星号活性。
3小时孵育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Component | Volume |
Substrate DNA | ≤1µg |
10X Buffer BsaI | 2µl |
BsaI | 0.5-1µl |
Ultrapure water | To 20µl |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6018 | 10X CutEZ™ Buffer | 5ml |
D6049 | ApaI | 2000U |
D6053 | BamHI | 2000U |
D6093 | BglII | 500U |
D6257 | DpnI | 500U |
D6258 | DpnI | 2500U |
D6329 | EcoRI | 2000U |
D6330 | EcoRI | 5000U |
D6337 | EcoRV | 1500U |
D6389 | HindIII | 2000U |
D6390 | HindIII | 5000U |
D6417 | KpnI | 1000U |
D6449 | MluI | 1000U |
D6481 | NcoI | 200U |
D6485 | NdeI | 400U |
D6489 | NheI | 200U |
D6497 | NotI | 150U |
D6565 | PstI | 1000U |
D6566 | PstI | 3000U |
D6581 | PvuII | 1000U |
D6585 | RsaI | 200U |
D6593 | SacI | 500U |
D6597 | SalI | 1000U |
D6633 | SmaI | 500U |
D6713 | XbaI | 1500U |
D6721 | XhoI | 2000U |