pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒)
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产品编号 D5002-100μg
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¥ 1169.00
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1μg 100μg
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pTac-His-MBP-WELQ是碧云天研发的一种用于在目的蛋白N端同时融合表达His标签(His tag)和MBP标签(MBP tag)的双标签,并在两个标签与目的蛋白之间有WELQ Protease (P2311)酶切位点的原核表达质粒。MBP标签的融合表达有利于提高目的蛋白的表达量和蛋白稳定性,促进蛋白的可溶性和正确折叠;而His标签有利于通过镍柱进行目的蛋白MBP融合蛋白的分离纯化。使用本质粒,在镍柱纯化后获得的含有His和MBP双标签的目的蛋白可以通过WELQ Protease酶切去除His标签和MBP标签。

本质粒含有Tac启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和MBP双标签的目的蛋白。

本质粒在MBP标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有PstⅠ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签和MBP标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。

可采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229)等纯化本质粒表达的目的蛋白融合蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。

本质粒为氨苄青霉素抗性。

pTac-His-MBP-WELQ质粒(6663bp)的图谱如下:

pTac-His-MBP-WELQ质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
lacI promoter 3-80
LacI coding sequence 81-1163
Tac promoter 1406-1434
lac operator 1442-1458
His tag coding sequence 1531-1560
MBP tag coding sequence 1561-2658
WELQ site 2683-2694
Multiple cloning sites (PstⅠ-XhoI) 2689-2750
M13 forward primer (M13 fwd) 2754-2770
Ampicillin resistance ORF 3435-4295
f1 origin 4337-4850
pBR322 origin 4961-5549

pTac-His-MBP-WELQ的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5002 pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒).pdf

pTac-His-MBP-WELQ中没有的酶切位点包括:

AarI AatII AbsI AflII AgeI AleI AscI
AsiSI AvrII BaeI BarI BbvCI BmtI BplI
BseRI BspDI BsrGI BstBI Bsu36I ClaI CspCI
EagI EcoNI FalI FseI I-CeuI I-PpoI I-SceI
KflI MauBI MfeI MreI NheI NotI NruI
PacI PasI PI-PspI PI-SceI PmeI PmlI PshAI
PsrI RsrII SbfI SexAI SfiI SgrAI SgrDI
SnaBI SpeI SphI SrfI StuI XmnI ZraI

pTac-His-MBP-WELQ中的单酶切位点包括:

Acc65I G`GTAC,C 2733 NcoI C`CATG,G 2739
AhdI GACNN,N`NNGTC 4222 NdeI CA`TA,TG 1526
ApaI G,GGCC`C 642 NgoMIV G`CCGG,C 4720
BamHI G`GATC,C 2727 NsiI A`TGCA,T 1532
BglII A`GATC,T 1917 PaeR7I C`TCGA,G 2745
BlpI GC`TNA,GC 2344 PciI A`CATG,T 5605
BmgBI CAC|GTC 2100 PflFI GACN`N,NGTC 5863
Bpu10I CC`TNA,GC 6500 PflMI CCAN,NNN`NTGG 13
BsiWI C`GTAC,G 1848 PluTI G,GCGC`C 1074
BsmI GAATG,CN` 2178 PspOMI G`GGCC,C 638
BspQI GCTCTTCN`NNN, 5722 PspXI VC`TCGA,GB 2745
BstEII G`GTNAC,C 612 PstI C,TGCA`G 2693
BstZ17I GTA|TAC 5838 SacI G,AGCT`C 2668
DraIII CAC,NNN`GTG 4619 SacII CC,GC`GG 2506
Eco53kI GAG|CTC 2666 SalI G`TCGA,C 2707
EcoRI G`AATT,C 2695 SapI GCTCTTCN`NNN, 5722
EcoRV GAT|ATC 881 ScaI AGT|ACT 3741
FspAI RTGC|GCAY 6628 SfoI GGC|GCC 1072
HindIII A`AGCT,T 2701 SmaI CCC|GGG 2723
HpaI GTT|AAC 937 StyI C`CWWG,G 2739
KasI G`GCGC,C 1070 SwaI ATTT|AAAT 4394
KpnI G,GTAC`C 2737 TspMI C`CCGG,G 2721
MluI A`CGCG,T 431 Tth111I GACN`N,NGTC 5863
MscI TGG|CCA 6638 XbaI T`CTAG,A 2713
NaeI GCC|GGC 4722 XhoI C`TCGA,G 2745
NarI GG`CG,CC 1071 XmaI C`CCGG,G 2721

pTac-His-MBP-WELQ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

Forward primer (2754-2770): 5'-ACTGGCCGTCGTTTTAC-3'

Reverse primer (1446-1469): 5'-GAGCGGATAACAATTTCACACAGG-3'

pTac-His-MBP-WELQ的全序列信息:D5002 pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒)序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D5002-1µg pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒) 1µg
D5002-100µg pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒) 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切及转化,在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
参考文献:
1.Dubin G, Stec-Niemczyk J, Kisielewska M, Pustelny K, Popowicz GM, et al. J Mol Biol. 2008. 379(2):343-56.
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