pCMV-HA-p53是碧云天自行研发生产的在哺乳动物细胞中表达HA标签的人源p53(1-393aa)融合蛋白的质粒,可以方便使用抗HA标签的抗体来识别p53蛋白的表达,或进行免疫共沉淀(Co-IP)分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。
p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53),是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的p53是一个重要的抑癌基因,在抑制癌症发生过程中扮演重要的角色,因此被称为“基因组的守护者”。p53全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,1979年因其在SDS-PAGE凝胶电泳中展示的分子量约为53kDa而得名p53,这种分子量的差异源自于p53存在大量的脯氨酸残基,减缓了其在SDS-PAGE凝胶电泳中的迁移速度[1-2]。
pCMV-HA-p53质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 235-818 |
HA tag | 904-930 |
human p53 | 943-2121 |
bGH poly(A) signal | 2226-2450 |
f1 ori | 2496-2924 |
SV40 promoter | 2938-3268 |
Neomycin resistance gene | 3335-4129 |
SV40 poly(A) signal | 4303-4424 |
ori | 4875-5463 |
Ampicillin resistance gene | 5634-6494 |
pCMV-HA-p53质粒(6630bp)的图谱如下:
pCMV-HA-p53质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3033 pCMV-HA-p53.pdf。
pCMV-HA-p53中没有的酶切位点包括:
AarI | AbsI | AccIII | Acc65I | AcvI | AflII | AgeI |
AleI | Aor13HI | AscI | AsiGI | AsiSI | Asp718I | AsuNHI |
BaeI | BanIII | BarI | BbrPI | BfrI | BlpI | BmtI |
Bpu1102I | Bsa29I | BseAI | BseCI | BshVI | BshTI | BsiWI |
BsmBI | Bsp13I | Bsp1407I | Bsp1720I | BspDI | BspEI | BspOI |
BspTI | BspXI | BsrGI | Bst98I | BstAFI | BstAUI | BstEII |
BstENI | BstHPI | BstPI | Bsu15I | BsuTUI | CelII | Cfr42I |
ClaI | CspAI | Eco72I | Eco91I | EcoNI | EcoO65I | Esp3I |
FseI | FspAI | HpaI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI |
KpnI | Kpn2I | KspI | KspAI | MauBI | MreI | MroI |
MspCI | MssI | NheI | OliI | PacI | PalAI | Pfl23II |
PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI | PmlI | PpuMI |
Psp5II | PspCI | PspEI | PspLI | PspPPI | PsrI | RgaI |
RigI | SacII | SanDI | SbfI | SdaI | SfaAI | SfiI |
Sfr303I | SgfI | SgrBI | SgsI | SmiI | SrfI | Sse8387I |
SspBI | SstII | SwaI | Vha464I | XagI |
pCMV-HA-p53中的单酶切位点包括:
AhdI | ApaI | AvrII | BamHI | BbvCI | BglII | BmgBI |
BssHII | BstBI | BstXI | BstZ17I | Bsu36I | DraIII | EcoRI |
EcoRV | HindIII | KasI | MfeI | MluI | NarI | NdeI |
NotI | NruI | PaeR7I | PasI | PflFI | PfoI | PluTI |
PshAI | PspOMI | PspXI | PvuI | RsrII | ScaI | SexAI |
SfoI | SgrAI | SgrDI | SmaI | SnaBI | SpeI | TspMI |
Tth111I | XbaI | XhoI | XmaI |
pCMV-HA-p53质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T7-F primer (863-882): 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
SP6-R primer (2181-2200): 5'-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3'
pCMV-HA-p53的全序列信息:D3033 pCMV-HA-p53-全序列.txt。
在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-HA-p53和pCMV-3X Flag-LTA(D3032),经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,p53和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(D3043)。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D3033-1μg | pCMV-HA-p53 | 1μg |
D3033-100μg | pCMV-HA-p53 | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2121 | BeyoMag™ Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA磁珠) | 0.5/2ml |
P2185S | HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) | 20-100/100-500次 |
P2206S | HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) | 20/100次 |
P2287-0.5ml | Anti-HA Affinity Gel (Anti-HA亲和凝胶) | 0.5/2/10ml |
AF2305 | HA Tag Rabbit Monoclonal Antibody | 50μl |
AF0039 | HA Tag Rabbit Polyclonal Antibody | 100μl |
AF5057 | HA Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
AH158 | HA抗体(小鼠单抗) | >40次 |
D3031 | pCMV-3X Flag-p53 | 1/100μg |
D3032 | pCMV-3X Flag-LTA | 1/100μg |
D3033 | pCMV-HA-p53 | 1/100μg |
D3036 | pCMV-Myc-LTA | 1/100μg |
D3041 | Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |
D3043 | Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |
D3045 | HA&Myc Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |