pCMV-3X Flag-LTA是碧云天自行研发生产的用于在哺乳动物细胞中表达带有3X Flag标签的LTA (large T antigen) (1-708aa)融合蛋白的质粒,可以方便地使用抗Flag标签的抗体来识别LTA蛋白的表达,或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。
LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen),也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1),由猿猴病毒40 (Simian virus 40, SV40)表达,全长708氨基酸,分子量为81.6kDa,是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化,可以诱导实验动物肿瘤的形成,为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型[1-3]。
pCMV-3X Flag-LTA质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 235-818 |
3X Flag tag | 901-966 |
SV40 large T antigen | 985-3108 |
bGH poly(A) signal | 3204-3428 |
f1 ori | 3474-3902 |
SV40 promoter | 3916-4246 |
Neomycin resistance gene | 4313-5107 |
SV40 poly(A) signal | 5281-5402 |
ori | 5853-6441 |
Ampicillin resistance gene | 6612-7577 |
pCMV-3X Flag-LTA质粒(7608bp)的图谱如下:
pCMV-3X Flag-LTA质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3032 pCMV-3X Flag-LTA.pdf。
pCMV-3X Flag-LTA中没有的酶切位点包括:
AarI | AbsI | AccIII | Acc65I | AcvI | AfeI | AflII |
AgeI | AjiI | AleI | Aor13HI | Aor51HI | AscI | AsiGI |
AsiSI | Asp718I | AsuNHI | AxyI | BaeI | BanIII | BarI |
BbrPI | BbvCI | BfrI | BlpI | BmgBI | BmtI | BoxI |
Bpu1102I | Bsa29I | Bse21I | BseAI | BseCI | BshVI | BshTI |
BsiWI | BsmBI | Bsp13I | Bsp1720I | BspDI | BspEI | BspOI |
BspTI | BspXI | Bst98I | BstAFI | BstEII | BstPI | BstPAI |
Bsu15I | Bsu36I | BsuTUI | BtrI | CciNI | CelII | Cfr42I |
ClaI | CspAI | Eco32I | Eco47III | Eco72I | Eco81I | Eco91I |
EcoO65I | EcoRI | EcoRV | Esp3I | FseI | FspAI | I-CeuI |
I-PpoI | I-SceI | KflI | KpnI | Kpn2I | KspI | MauBI |
MreI | MroI | MspCI | MssI | Nb.BbvCI | NheI | NotI |
Nt.BbvCI | OliI | PacI | PalAI | PasI | Pfl23II | PI-PspI |
PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI |
Psp5II | PspCI | PspEI | PspLI | PspPPI | PsrI | RgaI |
RigI | SacII | SanDI | SbfI | SdaI | SfaAI | SfiI |
Sfr303I | SgfI | SgrAI | SgrBI | SgsI | SmiI | SrfI |
Sse8387I | SstII | SwaI | Vha464I | XcmI |
pCMV-3X Flag-LTA中的单酶切位点包括:
AhdI | ApaI | AvrII | BamHI | BglII | Bpu10I | BsgI |
BssHII | BstBI | BstXI | BstZ17I | DraIII | EagI | HpaI |
KasI | MluI | MscI | NarI | NruI | PaeR7I | PciI |
PflFI | PflMI | PluTI | PspOMI | PspXI | PvuI | RsrII |
ScaI | SexAI | SfoI | SgrDI | SmaI | SnaBI | SpeI |
StuI | TspMI | Tth111I | XbaI | XhoI | XmaI |
pCMV-3X Flag-LTA质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
CMV-F primer (769-789): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
BGH-R primer (3198-3215): 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'
pCMV-3X Flag-LTA的全序列信息:D3032 pCMV-3X Flag-LTA-全序列.txt。
在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-p53 (D3033),经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,p53和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(D3043)。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D3032-1μg | pCMV-3X Flag-LTA | 1μg |
D3032-100μg | pCMV-3X Flag-LTA | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2115 | BeyoMag™ Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠) | 0.5/2ml |
P2181 | Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) | 20-100/100-500次 |
P2202 | Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) | 20/100次 |
P2271 | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 0.5/2/10ml |
P2282 | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 0.5/2/10ml |
AF0036 | FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody | 100μl |
AF5051 | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
AF519 | Flag抗体(小鼠单抗) | >40次 |
D3031 | pCMV-3X Flag-p53 | 1/100μg |
D3032 | pCMV-3X Flag-LTA | 1/100μg |
D3033 | pCMV-HA-p53 | 1/100μg |
D3036 | pCMV-Myc-LTA | 1/100μg |
D3041 | Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |
D3043 | Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |
D3045 | HA&Myc Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |