pCMV-3X Flag-LTA
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产品编号 D3032-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-3X Flag-LTA是碧云天自行研发生产的用于在哺乳动物细胞中表达带有3X Flag标签的LTA (large T antigen) (1-708aa)融合蛋白的质粒,可以方便地使用抗Flag标签的抗体来识别LTA蛋白的表达,或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。

LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen),也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1),由猿猴病毒40 (Simian virus 40, SV40)表达,全长708氨基酸,分子量为81.6kDa,是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化,可以诱导实验动物肿瘤的形成,为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型[1-3]。

pCMV-3X Flag-LTA质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 235-818
3X Flag tag 901-966
SV40 large T antigen 985-3108
bGH poly(A) signal 3204-3428
f1 ori 3474-3902
SV40 promoter 3916-4246
Neomycin resistance gene 4313-5107
SV40 poly(A) signal 5281-5402
ori 5853-6441
Ampicillin resistance gene 6612-7577

pCMV-3X Flag-LTA质粒(7608bp)的图谱如下:

pCMV-3X Flag-LTA质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3032 pCMV-3X Flag-LTA.pdf

pCMV-3X Flag-LTA中没有的酶切位点包括:

AarI AbsI AccIII Acc65I AcvI AfeI AflII
AgeI AjiI AleI Aor13HI Aor51HI AscI AsiGI
AsiSI Asp718I AsuNHI AxyI BaeI BanIII BarI
BbrPI BbvCI BfrI BlpI BmgBI BmtI BoxI
Bpu1102I Bsa29I Bse21I BseAI BseCI BshVI BshTI
BsiWI BsmBI Bsp13I Bsp1720I BspDI BspEI BspOI
BspTI BspXI Bst98I BstAFI BstEII BstPI BstPAI
Bsu15I Bsu36I BsuTUI BtrI CciNI CelII Cfr42I
ClaI CspAI Eco32I Eco47III Eco72I Eco81I Eco91I
EcoO65I EcoRI EcoRV Esp3I FseI FspAI I-CeuI
I-PpoI I-SceI KflI KpnI Kpn2I KspI MauBI
MreI MroI MspCI MssI Nb.BbvCI NheI NotI
Nt.BbvCI OliI PacI PalAI PasI Pfl23II PI-PspI
PI-SceI PinAI PmaCI PmeI PmlI PpuMI PshAI
Psp5II PspCI PspEI PspLI PspPPI PsrI RgaI
RigI SacII SanDI SbfI SdaI SfaAI SfiI
Sfr303I SgfI SgrAI SgrBI SgsI SmiI SrfI
Sse8387I SstII SwaI Vha464I XcmI

pCMV-3X Flag-LTA中的单酶切位点包括:

AhdI ApaI AvrII BamHI BglII Bpu10I BsgI
BssHII BstBI BstXI BstZ17I DraIII EagI HpaI
KasI MluI MscI NarI NruI PaeR7I PciI
PflFI PflMI PluTI PspOMI PspXI PvuI RsrII
ScaI SexAI SfoI SgrDI SmaI SnaBI SpeI
StuI TspMI Tth111I XbaI XhoI XmaI

pCMV-3X Flag-LTA质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

CMV-F primer (769-789): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'

BGH-R primer (3198-3215): 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'

pCMV-3X Flag-LTA的全序列信息:D3032 pCMV-3X Flag-LTA-全序列.txt

在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-p53 (D3033),经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,p53和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(D3043)

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D3032-1μg pCMV-3X Flag-LTA 1μg
D3032-100μg pCMV-3X Flag-LTA 100μg
说明书 1份
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl,共400µl。可以直接用于转染细胞。
参考文献:
1.Ahuja D, Sáenz-Robles MT, Pipas JM. Oncogene. 2005. 24(52):7729-7745.
2.Xiao CY, Jans P, Jans DA. FEBS Lett. 1998. 440(3):297-301.
3.Xiao CY, Jans DA. FEBS Lett. 1998. 436(3):313-317.
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