pCMV-3X Flag-p53是碧云天自行研发生产的在哺乳动物细胞中表达3X Flag标签的人源p53(1-393aa)融合蛋白的质粒,可以方便使用抗Flag标签的抗体来识别p53蛋白的表达,或进行免疫共沉淀(Co-IP)分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。
p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53),是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的p53是一个重要的抑癌基因,在抑制癌症发生过程中扮演重要的角色,因此被称为“基因组的守护者”。p53全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,1979年因其在SDS-PAGE凝胶电泳中展示的分子量约为53kDa而得名p53,这种分子量的差异源自于p53存在大量的脯氨酸残基,减缓了其在SDS-PAGE凝胶电泳中的迁移速度[1-2]。
pCMV-3X Flag-p53质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 235-818 |
3X Flag tag | 907-972 |
human p53 | 991-2169 |
bGH poly(A) signal | 2274-2498 |
f1 ori | 2544-2972 |
SV40 promoter | 2986-3316 |
Neomycin resistance gene | 3383-4177 |
SV40 poly(A) signal | 4351-4472 |
ori | 4923-5511 |
Ampicillin resistance gene | 5682-6542 |
pCMV-3X Flag-p53质粒(6678bp)的图谱如下:
pCMV-3X Flag-p53质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3031 pCMV-3X Flag-p53.pdf。
pCMV-3X Flag-p53中没有的酶切位点包括:
AarI | AbsI | AccIII | Acc65I | AcvI | AflII | AgeI |
AjiI | AleI | Aor13HI | AscI | AsiGI | AsiSI | Asp718I |
AsuNHI | BaeI | BanIII | BarI | BbrPI | BfrI | BlpI |
BmgBI | BmtI | Bpu1102I | Bsa29I | BseAI | BseCI | BshVI |
BshTI | BsiWI | BsmBI | Bsp13I | Bsp1407I | Bsp1720I | BspDI |
BspEI | BspOI | BspTI | BspXI | BsrGI | Bst98I | BstAFI |
BstAUI | BstEII | BstENI | BstHPI | BstPI | Bsu15I | BsuTUI |
BtrI | CelII | Cfr42I | ClaI | CspAI | Eco72I | Eco91I |
EcoNI | EcoO65I | Esp3I | FseI | FspAI | HpaI | I-CeuI |
I-PpoI | I-SceI | KflI | KpnI | Kpn2I | KspI | KspAI |
MauBI | MreI | MroI | MspCI | MssI | NheI | OliI |
PacI | PalAI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI |
PmeI | PmlI | PpuMI | Psp5II | PspCI | PspEI | PspLI |
PspPPI | PsrI | RgaI | RigI | SacII | SanDI | SbfI |
SdaI | SfaAI | SfiI | Sfr303I | SgfI | SgrBI | SgsI |
SmiI | SrfI | Sse8387I | SspBI | SstII | SwaI | Vha464I |
XagI |
pCMV-3X Flag-p53中的单酶切位点包括:
AhdI | ApaI | AvrII | BamHI | BbvCI | BglII | BssHII |
BstXI | BstZ17I | Bsu36I | CsiI | DraIII | EcoRI | EcoRV |
KasI | MfeI | MluI | NarI | NdeI | NotI | NruI |
PasI | PflFI | PfoI | PluTI | PshAI | PspOMI | PspXI |
RsrII | ScaI | SexAI | SfoI | SgrAI | SgrDI | SmaI |
SpeI | TspMI | Tth111I | XbaI | XhoI | XmaI |
pCMV-3X Flag-p53质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
CMV-F primer (769-789): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
BGH-R primer (2285-2268): 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'
pCMV-3X Flag-p53的全序列信息:D3031 pCMV-3X Flag-p53-全序列.txt。
在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA (D3036),经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,p53和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对(D3041)。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D3031-1μg | pCMV-3X Flag-p53 | 1μg |
D3031-100μg | pCMV-3X Flag-p53 | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2115 | BeyoMag™ Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠) | 0.5/2ml |
P2181 | Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) | 20-100/100-500次 |
P2202 | Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) | 20/100次 |
P2271 | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 0.5/2/10ml |
P2282 | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 0.5/2/10ml |
AF0036 | FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody | 100μl |
AF5051 | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
AF519 | Flag抗体(小鼠单抗) | >40次 |
D3031 | pCMV-3X Flag-p53 | 1/100μg |
D3032 | pCMV-3X Flag-LTA | 1/100μg |
D3033 | pCMV-HA-p53 | 1/100μg |
D3036 | pCMV-Myc-LTA | 1/100μg |
D3041 | Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |
D3043 | Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |
D3045 | HA&Myc Co-IP阳性对照质粒对 | 各1/100μg |