pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒带有两组T7启动子/lac操作子和核糖体结合位点(Ribosome binding site, RBS)，其中一组的多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)前有His标签(His tag)、Avi标签(Avi tag)和SUMO3标签(SUMO3 tag)，另一组用于表达带有S标签(S tag)的生物素连接酶(Biotin ligase) BirA，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白和BirA的共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下，细胞内表达的生物素连接酶BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。同时，本质粒带有SUMO3标签，可被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现相应标签蛋白与目的蛋白的高效分离。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是广泛存在于真核生物的蛋白家族。和泛素化(Ubiquitination)类似，类泛素蛋白修饰分子通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞核到细胞膜的运输、转录调控、细胞凋亡、蛋白质的稳定、压力应激和细胞周期的调控等[2]。
SUMO3标签源自人SUMO3基因，在大肠杆菌体系中SUMO3标签可以作为分子伴侣帮助目的蛋白在表达过程中正确折叠，提高目的蛋白的可溶性和表达量。SUMO3标签在体外可以被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现SUMO3标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留，因此SUMO3标签适用于大肠杆菌重组蛋白的表达和纯化[3]。
本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7-1 promoter | 6664-2 |
| Avi tag | 83-127 |
| His tag | 137-154 |
| SUMO3 tag | 161-436 |
| Multiple Cloning Sites | 434-484 |
| T7-2 promoter | 542-560 |
| BirA | 631-1593 |
| S tag | 1606-1650 |
| T7 Terminator | 1420-1467 |
| f1 origin | 1786-2241 |
| Ampicillin | 2356-3216 |
| ori | 3390-3978 |
| lacI | 5171-6253 |
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA质粒(6660bp)的图谱如下：
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3015 pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒).pdf。
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA中没有的酶切位点包括：
| AatII | AbsI | Acc65I | AcvI | AgeI | AhlI | AleI |
| AsiGI | AsiSI | Asp718I | AsuII | AsuNHI | BaeI | BbrPI |
| BcuI | BglII | BmtI | BoxI | BplI | Bpu14I | BshTI |
| BsiWI | Bsp68I | Bsp119I | BspOI | BspT104I | BstBI | BstPAI |
| BstSNI | BtuMI | Cfr9I | Cfr42I | CpoI | CsiI | CspI |
| Csp45I | CspAI | CspCI | Eco32I | Eco72I | Eco105I | EcoRV |
| EcoT22I | FalI | FseI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI |
| KflI | KpnI | KspI | MabI | MauBI | MfeI | Mph1103I |
| MreI | MssI | MunI | NheI | NruI | NsiI | NspV |
| OliI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI |
| PmlI | PshAI | PspCI | PspLI | PsrI | RgaI | RigI |
| RruI | RsrII | Rsr2I | SacII | SanDI | SexAI | SfaAI |
| SfiI | Sfr303I | SfuI | SgfI | SgrBI | SgrDI | SmaI |
| SmiI | SnaBI | SpeI | SrfI | SstII | SwaI | TspMI |
| XmaI | XmaCI | ZraI | Zsp2I |
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA中的单酶切位点包括：
| AflII | A`CRYG,T | 491 | NotI | GC`GGCC,GC | 478 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2429 | PacI | TTA,AT`TAA | 1669 |
| AvrII | C`CTAG,G | 1673 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1594 |
| BamHI | G`GATC,C | 434 | PciI | A`CATG,T | 4034 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 1111 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4292 |
| BmgBI | CAC|GTC | 412 | PpuMI | RG`GWC,CY | 5029 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 4151 | PsiI | A`CATG,T | 2144 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 518 | PspXI | VC`TCGA,GB | 1594 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 6222 | PvuI | CG,AT`CG | 2799 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 5716 | SacI | G,AGCT`C | 450 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 4267 | SalI | G`TCGA,C | 465 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 1576 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 4151 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 2019 | ScaI | AGT|ACT | 2909 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 448 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 6579 |
| EcoRI | G`AATT,C | 440 | SphI | G,CATG`C | 6431 |
| FspI | TGC|GCA | 2651 | SspI | AAT|ATT | 2224 |
| HindIII | A`AGCT,T | 471 | StuI | AGG|CCT | 293 |
| HpaI | GTT|AAC | 5396 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4292 |
| MluI | A`CGCG,T | 5898 | XbaI | T`CTAG,A | 30 |
| NcoI | C`CATG,G | 69 | XhoI | C`TCGA,G | 1594 |
| NdeI | CA`TA,TG | 626 |
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7-R (542-561): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA的全序列信息：D3015 pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒).txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3015-1µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA | 1µg |
| D3015-100µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3002-1µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3002-100µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3005-1µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3005-100µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3007-1µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3007-100µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3009-1µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3009-100µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3011-1µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3011-100µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3013-1µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3013-100µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3015-1µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3015-100µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3017-1µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3017-100µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
