pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒带有两组T7启动子/lac操作子和核糖体结合位点(Ribosome binding site, RBS)，其中一组的多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)位于His标签(His tag)和Avi标签(Avi tag)之间，另一组用于表达带有S标签(S tag)的生物素连接酶(Biotin ligase) BirA，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白和BirA的共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下，细胞内表达BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7-1 promoter | 6364-2 |
| His tag | 83-100 |
| Multiple Cloning Sites | 101-160 |
| Avi tag | 161-205 |
| T7-2 promoter | 262-280 |
| BirA | 351-1313 |
| S tag | 1326-1370 |
| T7 Terminator | 1422-1469 |
| f1 origin | 1506-1961 |
| Ampicillin | 2076-2936 |
| ori | 3110-3698 |
| lacI | 4891-5973 |
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA质粒(6380bp)的图谱如下：
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3013 pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒).pdf。
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA中没有的酶切位点包括：
| AatI | AatII | AbsI | Acc65I | AcvI | AgeI | AhlI |
| AjiI | AleI | AsiGI | AsiSI | Asp718I | AsuII | AsuNHI |
| BaeI | BbrPI | BcuI | BglII | BmgBI | BmtI | BoxI |
| BplI | Bpu14I | BshTI | BsiWI | Bsp68I | Bsp119I | BspOI |
| BspT104I | BstBI | BstPAI | BstSNI | BtrI | BtuMI | Cfr9I |
| Cfr42I | CpoI | CspI | Csp45I | CspAI | CspCI | Eco32I |
| Eco72I | Eco105I | Eco147I | EcoRV | EcoT22I | FalI | FseI |
| FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KpnI | KspI | MabI |
| MauBI | MfeI | Mph1103I | MreI | MssI | MunI | NheI |
| NruI | NsiI | NspV | OliI | PceI | Pfl23II | PI-PspI |
| PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI | PmlI | PshAI | PspCI |
| PspLI | PsrI | RgaI | RigI | RsrII | Rsr2I | SacII |
| SanDI | SexAI | SfaAI | SfiI | Sfr303I | SfuI | SgfI |
| SgrBI | SgrDI | SmaI | SmiI | SnaBI | SpeI | SrfI |
| SseBI | SstII | StuI | SwaI | TspMI | XmaI | XmaCI |
| ZraI | Zsp2I |
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA中的单酶切位点包括：
| AarI | CACCTGCNNNN`NNNN, | 1129 | NcoI | C`CATG,G | 69 |
| AflII | A`CRYG,T | 211 | NdeI | CA`TA,TG | 346 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2149 | NotI | GC`GGCC,GC | 150 |
| AscI | GG`CGCG,CC | 125 | PacI | TTA,AT`TAA | 1389 |
| AvrII | C`CTAG,G | 1393 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1314 |
| BamHI | G`GATC,C | 106 | PasI | CC`CWG,GG | 434 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 831 | PciI | A`CATG,T | 3754 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 1411 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4012 |
| BsmI | GAATG,CN` | 557 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4749 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 3871 | PsiI | A`CATG,T | 1864 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 238 | PspXI | VC`TCGA,GB | 1314 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5942 | PvuI | CG,AT`CG | 2519 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 5436 | SacI | G,AGCT`C | 122 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 3987 | SalI | G`TCGA,C | 137 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 1296 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 3871 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 1739 | ScaI | AGT|ACT | 2629 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 120 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 6299 |
| EcoRI | G`AATT,C | 112 | SphI | G,CATG`C | 6151 |
| FspI | TGC|GCA | 2371 | SspI | AAT|ATT | 1944 |
| HindIII | A`AGCT,T | 143 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4012 |
| HpaI | GTT|AAC | 5116 | XbaI | T`CTAG,A | 30 |
| MluI | A`CGCG,T | 5618 | XhoI | C`TCGA,G | 1314 |
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7-R (262-281): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA的全序列信息：D3013 pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒)全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3013-1µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA | 1µg |
| D3013-100µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3002-1µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3002-100µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3005-1µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3005-100µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3007-1µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3007-100µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3009-1µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3009-100µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3011-1µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3011-100µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3013-1µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3013-100µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3015-1µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3015-100µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3017-1µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3017-100µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
