pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His
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产品编号 D2951-100μg
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1μg 100μg
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pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His是碧云天研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端带有His标签(HHHHHHHH)人血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme2,ACE2)的胞外N端肽酶结构域(peptidase domain,PD) 1-615位的氨基酸所组成的蛋白,可以方便使抗His标签的抗体来识别ACE2(1-615)蛋白的表达,免疫共沉淀分析或者蛋白纯化等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,质粒为氨苄青霉素抗性。

ACE2是肾素-血管紧张素系统(Rennin-angiotension system,RAS)的重要成员。血管紧张素(Angiotensin II,Ang II)是RAS系统的主要效应分子,具有促进内皮细胞凋亡和促进炎症因子表达的作用。ACE2主要是通过降解血管紧张素II生成血管紧张素1-7(angiotensin-(1-7))从而发挥机体保护功能。ACE2是在肺、心脏、肾脏和肠中表达的I型膜蛋白,其胞外域包括N端肽酶结构域(Peptidase domain,PD)及C端Collectrin-like结构域(CLD)。ACE2是SARS冠状病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人类呼吸道冠状病毒NL63的受体。SARS-CoV/SARS-CoV-2通过其Spike蛋白受体结合域(Receptor binding domain,RBD)与ACE2的肽酶结构域结合,参与病毒的感染过程。SARS-CoV-2 Spike蛋白与ACE2的亲和力是SARS-CoV Spike蛋白与ACE2的亲和力的10-20倍。

pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 232-819
T7 promoter and T7 primer binding site 863-882
Multiple cloning site 895-922
ACE2(1-615) 923-2767
His-tag 2768-2791
BGH pA 2838-3062
f1 origin of ss-DNA replication 3108-3536
SV40 promoter 3541-3884
Neomycin resistance ORF 3946-4740
SV40 polyA signal 4914-5044
pUC origin 5427-6097
Ampicillin resistance ORF 6242-7238
bla promoter 7137-7143

pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His质粒(7238bp)的图谱如下:

pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2951 pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His.pdf

pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His)包括:

Acc65I G`GTAC,C 917 NruI TCG|CGA 208
AflII C`TTAA,G 908 PaeR7I C`TCGA,G 2795
ApaI G,GGCC`C 2811 PflFI GACN`N,NGTC 4192
AvrII C`CTAG,G 3864 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1965
BamHI G`GATC,C 1992 PluTI G,GCGC`C 4077
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 6820 PshAI GACNN|NNGTC 2751
BmtI G,CTAG`C 899 PspOMI G`GGCC,C 2807
BsaBI GATNN|NNATC 3933 PspXI VC`TCGA,GB 2795
BssHII G`CGCG,C 4471 PvuI CG,AT`CG 6685
BstBI TT`CG,AA 4756 RsrII CG`GWC,CG 4590
BstZ17I GTA|TAC 5046 SacI G,AGCT`C 818
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 626 SacII CC,GC`GG 1579
DraIII CAC,NNN`GTG 3341 SfoI GGC|GCC 4075
EagI C`GGCC,G 3980 SmaI CCC|GGG 3887
Eco53kI GAG|CTC 816 SnaBI TAC|GTA 590
EcoRI G`AATT,C 2722 SpeI A`CTAG,T 249
KasI G`GCGC,C 4073 TspMI C`CCGG,G 3885
KpnI G,GTAC`C 921 Tth111I GACN`N,NGTC 4192
MluI A`CGCG,T 228 XbaI T`CTAG,A 2801
MscI TGG|CCA 4156 XhoI C`TCGA,G 2795
NarI GG`CG,CC 4074 XmaI C`CCGG,G 3885
NheI G`CTAG,C 895

pcDNA3.1-ACE2(1-615)质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (2832-2849): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His的全序列信息:D2951 pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His序列.txt

pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His质粒转染HEK293T细胞后的表达效果请参考图1:

图1:Western blot实验检测SARS-CoV-2 ACE2(1-615)基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒;2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2(1-615)-His质粒。使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2(1-615)-His质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞,37℃恒温培养48h后,弃掉孔内培养液,PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解,4℃离心,取上清用BCA法测蛋白浓度,然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳,每孔蛋白总量20µg,转膜、封闭后使用1:1000稀释的His抗体(AH367)室温孵育1h,洗涤后1:1000稀释的辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)(A0216)室温孵育1h,最后经BeyoECL Star(P0018AS)化学发光,并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2951-1μg pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His 1μg
D2951-100μg pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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