pcDNA3.1-ACE2-Flag
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产品编号 D2949-1μg
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¥ 888.00
产品包装:
1μg 100μg
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pcDNA3.1-ACE2-Flag是碧云天研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端带有FLAG标签(DYKDDDDK)的人血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme2,ACE2)蛋白,可以方便使用抗Flag标签的抗体来识别ACE2蛋白的表达,或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,质粒为氨苄青霉素抗性。

ACE2是肾素-血管紧张素系统(Rennin-angiotension system,RAS)的重要成员。血管紧张素(Angiotensin II,Ang II)是RAS系统的主要效应分子,具有促进内皮细胞凋亡和促进炎症因子表达的作用。ACE2主要是通过降解血管紧张素II生成血管紧张素1-7(angiotensin-(1-7))从而发挥机体保护功能。ACE2是在肺、心脏、肾脏和肠中表达的I型膜蛋白,其胞外域包括N端肽酶结构域(Peptidase domain,PD)及C端Collectrin-like结构域(CLD)。ACE2是SARS冠状病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人类呼吸道冠状病毒NL63的受体。SARS-CoV/SARS-CoV-2通过其Spike蛋白受体结合域(Receptor binding domain,RBD)与ACE2的肽酶结构域结合,参与病毒的感染过程。SARS-CoV-2 Spike蛋白与ACE2的亲和力是SARS-CoV Spike蛋白与ACE2的亲和力的10-20倍。

pcDNA3.1(+)-ACE2-Flag质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 232-819
T7 promoter and T7 primer binding site 863-882
Multiple cloning site 895-922
ACE2 923-3337
Flag-tag 3338-3361
BGH pA 3408-3632
f1 origin of ss-DNA replication 3678-4106
SV40 promoter 4111-4454
Neomycin resistance ORF 4516-5310
SV40 polyA signal 5484-5614
pUC origin 5997-6667
Ampicillin resistance ORF 6812-7808
bla promoter 7707-7713

pcDNA3.1-ACE2-Flag质粒(7808bp)的图谱如下:

pcDNA3.1-ACE2-Flag的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2949 pcDNA3.1-ACE2-Flag.pdf

pcDNA3.1-ACE2-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-ACE2-Flag)包括:

AfeI AgeI AscI AsiSI BaeI BlpI BmgBI
BsiWI BsmBI BspEI BsrGI BstEII BstXI Bsu36I
Esp3I FseI HpaI NotI PacI PmlI SbfI
SfiI SgrAI SrfI SwaI

pcDNA3.1-ACE2-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-ACE2-Flag)包括:

Acc65I G`GTAC,C 917 NarI GG`CG,CC 4644
AflII C`TTAA,G 908 NheI G`CTAG,C 895
ApaI G,GGCC`C 3381 NruI TCG|CGA 208
AvrII C`CTAG,G 4434 PaeR7I C`TCGA,G 3365
BamHI G`GATC,C 1992 PflFI GACN`N,NGTC 4762
BcgI ,NN` (N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 7390 PluTI G,GCGC`C 4647
BmtI G,CTAG`C 899 PshAI GACNN|NNGTC 2751
BsaBI GATNN|NNATC 4503 PspOMI G`GGCC,C 3377
BspDI AT`CG,AT 3273 PspXI VC`TCGA,GB 3365
BssHII G`CGCG,C 5041 PvuI CG,AT`CG 7255
BstBI TT`CG,AA 5326 RsrII CG`GWC,CG 5160
BstZ17I GTA|TAC 5616 SacI G,AGCT`C 818
ClaI AT`CG,AT 3273 SacII CC,GC`GG 1579
CspCI ,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 626 SfoI GGC|GCC 4645
DraIII CAC,NNN`GTG 3911 SmaI CCC|GGG 4457
EagI C`GGCC,G 4550 SnaBI TAC|GTA 590
Eco53kI GAG|CTC 816 SpeI A`CTAG,T 249
EcoRI G`AATT,C 2722 TspMI C`CCGG,G 4455
EcoRV GAT|ATC 3001 Tth111I GACN`N,NGTC 4762
KasI G`GCGC,C 4643 XbaI T`CTAG,A 3371
KpnI G,GTAC`C 921 XhoI C`TCGA,G 3365
MluI A`CGCG,T 228 XmaI C`CCGG,G 4455
MscI TGG|CCA 4726

pcDNA3.1-ACE2-Flag质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

pcDNA3.1primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (3402-3419): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-ACE2-Flag的全序列信息: D2949 pcDNA3.1-ACE2-Flag序列.txt

pcDNA3.1-ACE2-Flag质粒转染HKE293T细胞后的表达效果请参考图1:

图1:Western blot实验检测SARS-CoV-2 N基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒;2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2-Flag质粒。使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2-Flag质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞,37℃恒温培养48h后,弃掉孔内培养液,PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解,4℃离心,取上清用BCA法测蛋白浓度,然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳,每孔蛋白总量20µg,转膜、封闭后使用1:1000稀释的Myc抗体(AM926)室温孵育1h,洗涤后1:1000稀释的二抗(A0192)室温孵育1h,最后经BeyoELC Star(P0018AS)化学发光,并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2949-1μg pcDNA3.1-ACE2-Flag 1μg
D2949-100μg pcDNA3.1-ACE2-Flag 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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