pcDNA3.1-ACE2-Flag是碧云天研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有FLAG标签(DYKDDDDK)的人血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme2，ACE2)蛋白，可以方便使用抗Flag标签的抗体来识别ACE2蛋白的表达，或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒为氨苄青霉素抗性。

ACE2是肾素-血管紧张素系统(Rennin-angiotension system，RAS)的重要成员。血管紧张素(Angiotensin II，Ang II)是RAS系统的主要效应分子，具有促进内皮细胞凋亡和促进炎症因子表达的作用。ACE2主要是通过降解血管紧张素II生成血管紧张素1-7(angiotensin-(1-7))从而发挥机体保护功能。ACE2是在肺、心脏、肾脏和肠中表达的I型膜蛋白，其胞外域包括N端肽酶结构域(Peptidase domain，PD)及C端Collectrin-like结构域(CLD)。ACE2是SARS冠状病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人类呼吸道冠状病毒NL63的受体。SARS-CoV/SARS-CoV-2通过其Spike蛋白受体结合域(Receptor binding domain，RBD)与ACE2的肽酶结构域结合，参与病毒的感染过程。SARS-CoV-2 Spike蛋白与ACE2的亲和力是SARS-CoV Spike蛋白与ACE2的亲和力的10-20倍。

pcDNA3.1(+)-ACE2-Flag质粒的主要信息如下：

pcDNA3.1-ACE2-Flag质粒(7808bp)的图谱如下：

pcDNA3.1-ACE2-Flag的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2949 pcDNA3.1-ACE2-Flag.pdf

pcDNA3.1-ACE2-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-ACE2-Flag)包括：

pcDNA3.1-ACE2-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-ACE2-Flag)包括：

pcDNA3.1-ACE2-Flag质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

pcDNA3.1primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (3402-3419): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-ACE2-Flag的全序列信息: D2949 pcDNA3.1-ACE2-Flag序列.txt。

pcDNA3.1-ACE2-Flag质粒转染HKE293T细胞后的表达效果请参考图1:

图1：Western blot实验检测SARS-CoV-2 N基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒；2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2-Flag质粒。使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2-Flag质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞，37℃恒温培养48h后，弃掉孔内培养液，PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解，4℃离心，取上清用BCA法测蛋白浓度，然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳，每孔蛋白总量20µg，转膜、封闭后使用1:1000稀释的Myc抗体(AM926)室温孵育1h，洗涤后1:1000稀释的二抗(A0192)室温孵育1h，最后经BeyoELC Star(P0018AS)化学发光，并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。

-20℃保存。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。