pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc是碧云天自行研发的包含了C端Myc标签序列和新冠病毒(SARS-CoV-2)纤突(Spike)蛋白基因序列的质粒。本产品在哺乳动物细胞中的表达效果未经验证,仅确保质粒序列正确。本质粒为氨苄青霉素抗性。
Spike蛋白(S蛋白)是冠状病毒的四个结构蛋白之一,为细胞表面糖蛋白(surface glycoprotein),由Spike基因编码,以同源三聚体的形式存在于冠状病毒刺突上,参与受体识别和膜融合等病毒感染过程。在结构上,Spike蛋白分为三个主要结构域:胞外区、跨膜区和胞内区,其中胞外区包括S1,S2两个结构域,S1结构域位于Spike蛋白N端,含有宿主受体结构域(receptor binding domain,RBD),SARS-CoV-2通过RBD与血管紧张素转换酶2(ACE2)的肽酶结构域(peptidase domain)结合,参与SARS-CoV-2病毒的感染。SARS-CoV-2 Spike蛋白与ACE2的亲和常数大约为15nM,是SARS-CoV Spike蛋白与ACE2的亲和常数的10-20倍[1];S2结构域位于Spike蛋白的C端,由一段融合肽段与两个疏水螺旋重复区(HR1,HR2)组成,参与病毒感染的膜融合过程。Spike蛋白是冠状病毒疫苗、治疗性抗体和诊断方法的关键靶标。
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 232-819 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 863-882 |
Multiple cloning site | 895-922 |
Spike protein | 923-4741 |
Myc-tag | 4742-4771 |
BGH pA | 4812-5042 |
f1 origin of ss-DNA replication | 5088-5516 |
SV40 promoter | 5521-5864 |
Neomycin resistance ORF | 5926-6720 |
SV40 polyA signal | 6894-7024 |
pUC origin | 7407-8077 |
Ampicillin resistance ORF | 8222-9218 |
bla promoter | 9117-9123 |
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc质粒(9218bp)的图谱如下:
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2945 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc.pdf
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc)包括:
AfeI | AgeI | AscI | AsiSI | BaeI | BbvCI | BlpI |
BsiWI | BsmBI | BspEI | Esp3I | FseI | NotI | PacI |
PflMI | PpuMI | SacII | SbfI | SfiI | SgrAI | SrfI |
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc)包括:
Acc65I | G`GTAC,C | 917 | KpnI | G,GTAC`C | 921 |
AflII | C`TTAA,G | 908 | MfeI | C`AATT,G | 161 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 8295 | MluI | A`CGCG,T | 228 |
AleI | CACNN|NNGTG | 4283 | NarI | GG`CG,CC | 6054 |
ApaI | G,GGCC`C | 4791 | NheI | G`CTAG,C | 895 |
BamHI | G`GATC,C | 4673 | NruI | TCG|CGA | 208 |
BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 8800 | PaeR7I | C`TCGA,G | 4775 |
BmgBI | CAC|GTC | 3869 | PluTI | G,GCGC`C | 6057 |
BmtI | G,CTAG`C | 899 | PshAI | GACNN|NNGTC | 4121 |
Bpu10I | CC`TNA,GC | 180 | PspOMI | G`GGCC,C | 4787 |
BspDI | AT`CG,AT | 4515 | PspXI | VC`TCGA,GB | 4775 |
BssHII | G`CGCG,C | 6451 | PvuI | CG,AT`CG | 8665 |
BstEII | G`GTNAC,C | 2432 | RsrII | CG`GWC,CG | 6570 |
BstZ17 | GTA|TAC | 7026 | SacI | G,AGCT`C | 818 |
Bsu36I | CC`TNA,GG | 1572 | SfoI | GGC|GCC | 6055 |
ClaI | AT`CG,AT | 4515 | SmaI | CCC|GGG | 5867 |
EagI | C`GGCC,G | 5960 | SnaBI | TAC|GTA | 590 |
Eco53kI | GAG|CTC | 816 | StuI | AGG|CCT | 5843 |
EcoO109I | RG`GNC,CY | 4787 | SwaI | ATTT|AAAT | 4500 |
EcoRI | G`AATT,C | 2230 | TspMI | C`CCGG,G | 5865 |
EcoRV | GAT|ATC | 3859 | XbaI | T`CTAG,A | 4781 |
HpaI | GTT|AAC | 2767 | XhoI | C`TCGA,G | 4775 |
KasI | G`GCGC,C | 6053 | XmaI | C`CCGG,G | 5865 |
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'
BGH pA primer (4812-4829): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc的全序列信息:D2945 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc序列.txt。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2945-1μg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc | 1μg |
D2945-100μg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2941-1µg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc | 1µg |
D2941-100µg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc | 100µg |
D2943-1µg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc | 1µg |
D2943-100µg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc | 100µg |
D2945-1µg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-Spike-Myc | 1µg |
D2945-100µg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2- Spike -Myc | 100µg |
D2947-1µg | pCMV-SARS-CoV-2-E-Myc | 1µg |
D2947-100µg | pCMV-SARS-CoV-2-E-Myc | 100µg |
D2949-1µg | pcDNA3.1-ACE2 -Flag | 1µg |
D2949-100µg | pcDNA3.1-ACE2 -Flag | 100µg |
D2951-1µg | pcDNA3.1-ACE2(1-615) -His | 1µg |
D2951-100µg | pcDNA3.1-ACE2(1-615) - His | 100µg |
D2953-1µg | pUC18-SARS-CoV-2-ORF1ab(168bp) | 1µg |
D2953-100µg | pUC18-SARS-CoV-2-ORF1ab(168bp) | 100µg |