pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有Myc标签(EQKLISEEDL)的新冠病毒(SARS-CoV-2) 核衣壳(Nucleocapsid, N)蛋白，可以使用抗Myc标签的抗体来识别N蛋白的表达，或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒为氨苄青霉素抗性。

N蛋白是冠状病毒的四个结构蛋白之一，由N基因编码，为核衣壳磷酸蛋白(nucleocapsid phosphoprotein)，是冠状病毒的主要结构蛋白，也是冠状病毒编码蛋白中表达丰度最高的蛋白。N蛋白在病毒的组装、释放以及病毒的致病性方面发挥重要作用。冠状病毒N蛋白功能相对保守，包含两个结构独立的RNA结合结构域：N端RNA结合结构域(N-terminal RNA binding domain，NTD)和C端结构域(C-terminal domain，CTD)，中间还有一个丝氨酸和精氨酸富集的连接区(serine and arginine linker region, SR linker)。冠状病毒的N蛋白能与病毒RNA紧密结合，通过螺旋堆积将RNA包装，从而保护病毒的基因组RNA。在病毒感染过程中，N蛋白是所有结构蛋白中诱导免疫反应最强烈的蛋白，由于其分子量小，没有糖基化修饰，易于蛋白表达纯化，因此常作为冠状病毒血清学检查最为合适的抗原。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒的主要信息如下：

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒(6650bp)的图谱如下：

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2943 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc.pdf

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc)包括：

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc)包括：

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (2244-2261): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc的全序列信息: D2943 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc序列.txt。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒转染HEK293T细胞后的表达效果请参考图1:

图1：Western blot实验检测SARS-CoV-2 N基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒；2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒。使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞，37℃恒温培养48h后，弃掉孔内培养液，PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解，4℃离心，取上清用BCA法测蛋白浓度，然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳，每孔蛋白总量20µg，转膜、封闭后使用1:1000稀释的Myc抗体(AM926)室温孵育1h，洗涤后1:1000稀释的二抗(A0192)室温孵育1h，最后经BeyoELC Star(P0018AS)化学发光，并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。

-20℃保存。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。