pET-N-His-PreScission-SUMO是一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化,而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠,增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签,也可以通过SUMO Protease (P2312)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。
如果通过无缝克隆技术(Seamless Cloning Kit, 无缝克隆试剂盒)在SUMO标签酶切位点后插入目的蛋白ATG起始的序列,SUMO Protease酶切后,可以确保表达的目的蛋白氨基端(N端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始,不会增加或减少任何一个氨基酸,实现目的蛋白的完美正确表达。
本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。
本载体在N端His标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签,但在SUMO融合蛋白的N端还会保留两个额外的氨基酸GP。在用SUMO Protease酶切除去SUMO标签的时候,SUMO Protease识别的是SUMO蛋白的空间结构,通过无缝克隆的方式在CAGATTGGTGGA (对应氨基酸为QIGG)序列后插入目的蛋白的基因序列,在用SUMO Protease进行酶切的时候,其正好在QIGG后产生酶切,因此可以产生不带任何额外氨基酸的目的蛋白,而这是很多做蛋白结构和功能研究的研究人员所梦寐以求的。
可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。
pET-N-His-PreScission-SUMO质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
f1 origin | 12-467 |
Kanamycin resistance ORF | 563-1645 |
PBR 322 origin | 2084 |
LacI coding sequence | 3518-4597 |
T7 promoter | 4988-5004 |
His tag coding sequence | 5088-5105 |
PreScission recognition site sequence | 5115-5138 |
SUMO tag coding sequence | 5151-5441 |
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) | 5442-5486 |
T7 Terminator | 5554-5600 |
pET-N-His-PreScission-SUMO质粒(5625bp)的图谱如下:
pET-N-His-PreScission-SUMO的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO.pdf
pET-N-His-PreScission-SUMO中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-PreScission-SUMO)包括:
AatII | Acc65I | AgeI | AhdI | AscI | AvrII | BaeI |
BbvCI | BfuAI | BmgBI | BsaI | BseRI | BsiWI | BspMI |
BsrGI | BstBI | Bsu36I | CspCI | EcoRV | FseI | KpnI |
MfeI | MscI | NcoI | PacI | PmeI | PmlI | PstI |
RsrII | SacII | SbfI | ScaI | SexAI | SfiI | SnaBI |
SpeI | SrfI | StuI | SwaI | ZraI |
pET-N-His-PreScission-SUMO中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-PreScission-SUMO once)包括:
AflII | C`TTAA,G | 5336 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 4041 |
AleI | CACNN|NNGTG | 5483 | NotI | GC`GGCC,GC | 5473 |
AlwNI | GAG,NNN`CTG | 1729 | NruI | TCG|CGA | 1286 |
AsiSI | GCG,AT`CGC | 943 | PaeR7I | C`TCGA,G | 5481 |
BamHI | G`GATC,C | 5442 | PciI | A`CATG,T | 2141 |
Bg1I | GCCN,NNN`NGGC | 3182 | PflFI | GACN`N,NGTC | 2399 |
Bg1II | A`GATC,T | 5251 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3136 |
BmtI | G,CTAG`C | 5145 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3401 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 | PsiI | TTA|TAA | 370 |
BssHII | G`CGCG,C | 3831 | PspXI | VC`TCGA,GB | 5481 |
BssSI | C`ACGA,G | 1968 | PvuI | CG,AT`CG | 943 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4563 | SacI | G,AGCT`C | 5460 |
BstEII | G`GTNAC,C | 4060 | SalI | G`TCGA,C | 5448 |
BstZ17I | GTA|TAC | 2374 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 |
DraI | TTT|AAA | 5227 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 4923 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 242 | SmaI | CCC|GGG | 1069 |
EagI | C`GGCC,G | 5473 | SphI | G,CATG`C | 4771 |
Eco53kI | GAG|CTC | 5462 | StyI | C`CWWG,G | 5564 |
EcoRI | G`AATT,C | 5454 | TspMI | C`CCGG,G | 1067 |
FspI | TGC|GCA | 3164 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 2399 |
HindIII | A`AGCT,T | 5466 | XbaI | T`CTAG,A | 5034 |
HpaI | GTT|AAC | 3740 | XhoI | C`TCGA,G | 5481 |
MluI | A`CGCG,T | 4242 | XmaI | C`CCGG,G | 1067 |
NheI | G`CTAG,C | 5145 |
pET-N-His-PreScission-SUMO的全序列信息:pET-N-His-PreScission-SUMO全序列.txt
不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2918-1µg | pET-N-His-PreScission-SUMO | 1μg |
D2918-100µg | pET-N-His-PreScission-SUMO | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
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