pET-N-His-PreScission-SUMO
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产品编号 D2918-1μg
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¥ 888.00
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1μg 100μg
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pET-N-His-PreScission-SUMO是一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化,而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠,增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签,也可以通过SUMO Protease (P2312)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。

如果通过无缝克隆技术(Seamless Cloning Kit, 无缝克隆试剂盒)在SUMO标签酶切位点后插入目的蛋白ATG起始的序列,SUMO Protease酶切后,可以确保表达的目的蛋白氨基端(N端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始,不会增加或减少任何一个氨基酸,实现目的蛋白的完美正确表达。

本质粒为卡那霉素抗性。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。

本载体在N端His标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签,但在SUMO融合蛋白的N端还会保留两个额外的氨基酸GP。在用SUMO Protease酶切除去SUMO标签的时候,SUMO Protease识别的是SUMO蛋白的空间结构,通过无缝克隆的方式在CAGATTGGTGGA (对应氨基酸为QIGG)序列后插入目的蛋白的基因序列,在用SUMO Protease进行酶切的时候,其正好在QIGG后产生酶切,因此可以产生不带任何额外氨基酸的目的蛋白,而这是很多做蛋白结构和功能研究的研究人员所梦寐以求的。

可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。

pET-N-His-PreScission-SUMO质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
His tag coding sequence 5088-5105
PreScission recognition site sequence 5115-5138
SUMO tag coding sequence 5151-5441
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5442-5486
T7 Terminator 5554-5600

pET-N-His-PreScission-SUMO质粒(5625bp)的图谱如下:

pET-N-His-PreScission-SUMO的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO.pdf

pET-N-His-PreScission-SUMO中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-PreScission-SUMO)包括:

AatII Acc65I AgeI AhdI AscI AvrII BaeI
BbvCI BfuAI BmgBI BsaI BseRI BsiWI BspMI
BsrGI BstBI Bsu36I CspCI EcoRV FseI KpnI
MfeI MscI NcoI PacI PmeI PmlI PstI
RsrII SacII SbfI ScaI SexAI SfiI SnaBI
SpeI SrfI StuI SwaI ZraI

pET-N-His-PreScission-SUMO中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-PreScission-SUMO once)包括:

AflII C`TTAA,G 5336 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041
AleI CACNN|NNGTG 5483 NotI GC`GGCC,GC 5473
AlwNI GAG,NNN`CTG 1729 NruI TCG|CGA 1286
AsiSI GCG,AT`CGC 943 PaeR7I C`TCGA,G 5481
BamHI G`GATC,C 5442 PciI A`CATG,T 2141
Bg1I GCCN,NNN`NGGC 3182 PflFI GACN`N,NGTC 2399
Bg1II A`GATC,T 5251 PpuMI RG`GWC,CY 3136
BmtI G,CTAG`C 5145 PshAI GACNN|NNGTC 3401
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2258 PsiI TTA|TAA 370
BssHII G`CGCG,C 3831 PspXI VC`TCGA,GB 5481
BssSI C`ACGA,G 1968 PvuI CG,AT`CG 943
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563 SacI G,AGCT`C 5460
BstEII G`GTNAC,C 4060 SalI G`TCGA,C 5448
BstZ17I GTA|TAC 2374 SapI GCTCTTCN`NNN, 2258
DraI TTT|AAA 5227 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
DraIII CAC,NNN`GTG 242 SmaI CCC|GGG 1069
EagI C`GGCC,G 5473 SphI G,CATG`C 4771
Eco53kI GAG|CTC 5462 StyI C`CWWG,G 5564
EcoRI G`AATT,C 5454 TspMI C`CCGG,G 1067
FspI TGC|GCA 3164 Tth111I GACN`N,NGTC 2399
HindIII A`AGCT,T 5466 XbaI T`CTAG,A 5034
HpaI GTT|AAC 3740 XhoI C`TCGA,G 5481
MluI A`CGCG,T 4242 XmaI C`CCGG,G 1067
NheI G`CTAG,C 5145

pET-N-His-PreScission-SUMO的全序列信息:pET-N-His-PreScission-SUMO全序列.txt

不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:

http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2918-1µg pET-N-His-PreScission-SUMO 1μg
D2918-100µg pET-N-His-PreScission-SUMO 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-N-His-PreScission-SUMO质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,或者也可以同无缝克隆技术在SUMO标签之后插入目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株进行表达纯化。
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