pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin是碧云天研发的以毕赤酵母(Pichia pastoris)为表达菌株、利用α factor分泌表达C端带有His标签的目的蛋白的真核表达质粒。在多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，就可以表达C端带有His标签的目的蛋白。
毕赤酵母作为蛋白真核表达系统有很多优势：有助于蛋白正确折叠、翻译后修饰及易于操作等。与昆虫表达系统和哺乳动物细胞表达系统相比，它快速、高效且经济，通常外源蛋白还具有较高的表达水平。与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)相比，其外源蛋白表达水平往往高10-100倍，它们均能进行分泌蛋白的N-连接糖苷键修饰，糖基化修饰时糖链长度是有差别的，毕赤酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是8-14甘露糖残基(Mannose residue)，而酿酒酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是50-150个甘露糖残基；毕赤酵母很少对分泌蛋白进行O-连接糖苷键的修饰。
本质粒转化X-33, SMD1168H或KM71菌株后，因为宿主菌有功能完好的组氨酸脱氢酶基因，适合进行Zeocin筛选转化子，并能使目的基因在甲醇诱导后实现高水平表达。常用的毕赤酵母宿主菌GS115 (D0412)和KM71 (D0413)，二者的组氨酸脱氢酶基因(his4)发生突变，阻止它们合成组氨酸，因此具有His4-营养缺陷标记，适合在组氨酸缺少的培养基进行转化子筛选。GS115/X-33/ SMD1168H菌株具有功能完整的AOX1基因，属于Mut+ (Methanol utilization plus)表型，即甲醇利用正常，在甲醇诱导的情况下生产快速。而KM71/KM71H菌株的AOX1位点被ARG4基因插入破坏，表型为Muts (Methanol utilization slow)，即甲醇利用缓慢，在甲醇诱导的情况下生产缓慢。
本质粒5'端含有醇氧化酶基因AOX1启动子，可以高效启动目的基因的表达。在毕赤酵母中，AOX1启动子属于甲醇诱导型强启动子，其严格依赖于甲醇的诱导，并受葡萄糖、果糖、甘油、乙醇等碳源的抑制，因此可通过控制葡萄糖、甘油等碳源的消耗和甲醇的流加来调控AOX1启动子的表达。
本质粒含有酿酒酵母的α-factor信号肽，用于引导目的蛋白的分泌表达。α-factor信号肽引导目的蛋白进入分泌通路后，Kex2基因编码的类枯草菌素蛋白酶(Subtilisin-like protease)识别α-factor C末端的EKREAEA序列，并在KR之后进行剪切，这样目的蛋白N端会携带4个氨基酸残基(EAEA)，此时可能被Ste13基因编码的二肽蛋白酶氨基肽酶A (Dipeptidyl aminopeptidase A)识别EAEA基序并切割，因此分泌到胞外的目的蛋白的N端可能会残留2-4个氨基酸残基。
本质粒为Zeocin (博来霉素)抗性。博来霉素(ST1450)抗性可用于大肠杆菌和酵母的筛选，大肠杆菌筛选推荐浓度为25-50μg/ml (低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L)，酵母筛选推荐浓度为50-300μg/ml (YPD或基本培养基)。
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin质粒(3529bp)的图谱如下：
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AOX1 promoter | 2..940 |
| α-factor secretion signal | 941..1207 |
| 6×His | 1256..1273 |
| AOX1 terminator | 1353..1599 |
| TEF1 promoter | 1614..2025 |
| EM7 promoter | 2033..2080 |
| BleoR | 2099..2473 |
| CYC1 terminator | 2539..2786 |
| ori | 2861..3449 |
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2882 pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin.pdf
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AccIII | Acc16I | Acc36I | Acc113I | AcvI |
| AfeI | AflII | AhdI | AhlI | AjuI | AloI | Aor13HI |
| Aor51HI | AscI | AsiSI | AspI | Asp700I | AspA2I | AspEI |
| AviII | AvrII | AxyI | BaeI | BanIII | BarI | BbeI |
| BbrPI | BbvCI | BcgI | BcuI | BfrI | BfuAI | BlnI |
| BmcAI | BmeRI | BoxI | Bpu10I | BpvUI | Bsa29I | BsaAI |
| Bse21I | BseAI | BseCI | BsgI | BshVI | BsmBI | Bsp13I |
| Bsp68I | BspDI | BspEI | BspMI | BspQI | BspTI | BspXI |
| BssNAI | Bst98I | Bst1107I | BstAFI | BstBAI | BstEII | BstENI |
| BstHPI | BstPI | BstPAI | BstSNI | BstZ17I | Bsu15I | Bsu36I |
| BsuTUI | BtsαI | BtuMI | BveI | CciNI | Cfr42I | ClaI |
| CpoI | CspI | CspCI | DinI | DriI | Eam1105I | Eco47III |
| Eco72I | Eco81I | Eco91I | Eco105I | EcoNI | EcoO65I | EgeI |
| EheI | Esp3I | FalI | FspI | FspAI | HpaI | I-CeuI |
| I-PpoI | I-SceI | KasI | Kpn2I | KspI | KspAI | LguI |
| Mly113I | MreI | MroI | MroXI | MspCI | NarI | NotI |
| NruI | NsbI | PacI | PalAI | PasI | PciSI | PdmI |
| PflFI | PI-PspI | PI-SceI | Ple19I | PluTI | PmaCI | PmlI |
| Ppu21I | PshAI | PspCI | PspEI | PspXI | PsrI | PstI |
| PsyI | PvuI | RgaI | RruI | RsrII | Rsr2I | SacII |
| SapI | SbfI | ScaI | SdaI | SfaAI | SfiI | SfoI |
| Sfr303I | SgfI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SmiI | SnaBI |
| SpeI | SrfI | Sse8387I | SspI | SspDI | SstII | SwaI |
| TsoI | TstI | Tth111I | Vha464I | XagI | XmaJI | XmnI |
| ZrmI |
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin中的单酶切位点包括：
| AatII | Acc65I | AccI | AgeI | AleI | AlwNI | ApaI |
| BamHI | BglII | BlpI | BmrI | BmtI | BseYI | BsiWI |
| BsrDI | BsrGI | BssHII | BssSI | BstAPI | BstBI | BstXI |
| BtgZI | DraI | DraIII | EagI | Eco53kI | EcoRI | EcoRV |
| FseI | HaeII | HindIII | KpnI | MfeI | MluI | MscI |
| MslI | NcoI | NdeI | NheI | NsiI | PaeR7I | PciI |
| PflMI | PmeI | PsiI | PspOMI | PvuII | SacI | SalI |
| SexAI | SgrAI | SmaI | SphI | StuI | StyI | TspMI |
| XbaI | XcmI | XhoI | XmaI | ZraI |
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin质粒可使用的测序引物序列如下：
5' AOX1 sequencing primer (855-875): 5'-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3'
3' AOX1 sequencing primer (1359-1379): 5'-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3'
pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin的全序列信息:D2882 pAOX1-α factor-MCS-His- Zeocin 全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2882-1µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin | 1µg |
| D2882-100µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| ST1450-20mg | Zeocin (博莱霉素) | 20mg |
| ST1450-100mg | Zeocin (博莱霉素) | 100mg |
| ST1450-0.25ml | Zeocin (博莱霉素) | 20mg/ml×0.25ml |
| ST1450-1ml | Zeocin (博莱霉素) | 20mg/ml×1ml |
| D2881-1µg | pAOX1-MCS-His-Zeocin | 1µg |
| D2881-100µg | pAOX1-MCS-His-Zeocin | 100µg |
| D2883-1µg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 1µg |
| D2883-100µg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 100µg |
| D2884-1µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Amp&Zeo | 1µg |
| D2884-100µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Amp&Zeo | 100µg |
| D0412 | 毕赤酵母GS115甘油菌 | 200μl |
| D0413 | 毕赤酵母KM71甘油菌 | 200μl |
| D0414 | 毕赤酵母X-33甘油菌 | 200μl |
