pCMV-CD63-EGFP是碧云天自行研发的一种可以在哺乳动物细胞中通过CMV启动子表达人源CD63-EGFP融合蛋白的的质粒。本产品可用于外泌体的示踪研究，用于研究外泌体的形成、分泌、靶向和运输机制。该质粒带有卡那霉素(Kanamycin)抗性。
外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直径约为40-160nm，具有脂质双分子层结构，天然存在于血液、尿液、脑脊液，以及体外培养细胞的上清液中[1]，几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。如图1所示，细胞膜内吞(Endocytosis)依次形成初级内体(Early sorting endosome, ESE)、次级内体(Late sorting endosome, LSE)和多囊泡体(Multivesicular body, MVB)，其中多囊泡体包含腔内囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs)。多囊泡体与细胞膜融合形成外泌体，外泌体携带多种来自其母体细胞的成分(包括核酸、蛋白质、脂类和代谢物等)释放到胞外基质中[3]。外泌体可以被附近或远距离的细胞识别和融合，是细胞间进行相互调控的重要媒介，参与了癌症、神经退行性病变和炎症性疾病等多种疾病的发病过程，影响细胞多方面的功能[4-5]。
图1. 外泌体的形成原理及其携带的母体细胞的成分示意图。
外泌体标记标志蛋白(Protein biomarkers for exosome)，也称外泌体蛋白标志物(Protein markers for exosome)，可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体据库(ExoCarta, http://www.exocarta.org)统计来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现9769种蛋白质，E00xoCarta列出了100种常见外泌体标记蛋白标志物(http://exocarta.org/exosome_markers_new)，其中CD9、CD63、CD81、Alix、Flotillin、Ceramide和Tumor susceptibility gene 101 (TSG101)是最常用的外泌体标志蛋白标志物(如图2所示[3])。CD63在人体中由CD63基因编码的蛋白质抗原，是跨膜四超家族(Transmembrane 4 superfamily)成员之一，为4次跨膜蛋白[1]，大量存在于细胞外囊泡的表面，也会出现在普通的细胞膜表面。CD63是最常用的外泌体标志蛋白标志物之一，被认为是调控细胞外囊泡产生和胞内物质分选的关键因子[6]。
图2. 常见的外泌体标志蛋白标志物示意图。
pCMV-CD63-EGFP质粒转染HEK293T细胞的效果如图3所示。
图3. 碧云天生产的pCMV-CD63-EGFP (D2839)质粒转染HEK293T细胞效果图。pCMV-CD63-EGFP质粒转染HEK293T细胞24小时后，经荧光显微镜观察。实际荧光强度会因实验仪器、检测条件的不同而存在差异，本图仅供参考。
pCMV-CD63-EGFP质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 61-568 |
| human CD63 | 612-1325 |
| EGFP | 1341-2060 |
| SV40 poly(A) signal | 2178-2299 |
| f1 ori | 2306-2761 |
| Ampicillin promoter | 2788-2892 |
| SV40 promoter | 2894-3251 |
| Neomycin/Kanamycin resistance gene | 3286-4080 |
| HSV TK poly(A) signal | 4312-4359 |
| ori | 4688-5276 |
pCMV-CD63-EGFP质粒(5390bp)的图谱如下：
pCMV-CD63-EGFP质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2839 pCMV-CD63-EGFP (外泌体示踪用).pdf。
pCMV-CD63-EGFP中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AccI | AccIII | Acc65I | Acc113I | AccB7I |
| AclI | AcvI | AhdI | AhlI | AjiI | AjuI | Ama87I |
| Aor13HI | ApaI | AscI | AsiSI | Asp700I | Asp718I | AspEI |
| AvaI | BaeI | BarI | BbrPI | BcuI | BglII | BlpI |
| BmcAI | BmeRI | BmeT110I | BmgBI | BoxI | Bpu1102I | BpvUI |
| BseAI | BsePI | BsiHKCI | BsiWI | BsmBI | BsoBI | Bsp13I |
| Bsp68I | Bsp120I | Bsp1720I | BspEI | BssHII | BssNAI | Bst1107I |
| BstEII | BstENI | BstPI | BstPAI | BstZ17I | BtrI | BtuMI |
| CciNI | CelII | Cfr9I | Cfr42I | DriI | Eam1105I | Ecl136II |
| Eco32I | Eco53kI | Eco72I | Eco88I | Eco91I | EcoICRI | EcoNI |
| EcoO65I | EcoRI | EcoRV | Esp3I | FblI | FseI | FspAI |
| HindIII | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI | KpnI | Kpn2I |
| KspI | MauBI | MluI | MreI | MroI | MroXI | MssI |
| NotI | NruI | PacI | PaeR7I | PalAI | PauI | PdmI |
| Pfl23II | PflMI | PI-PspI | PI-SceI | Ple19I | PmaCI | PmeI |
| PmlI | PpuMI | PshAI | Psp5II | Psp124BI | Psp1406I | PspCI |
| PspEI | PspLI | PspOMI | PspPPI | PspXI | PsrI | PteI |
| PvuI | RgaI | RigI | RruI | SacI | SacII | SalI |
| SanDI | SbfI | ScaI | SdaI | SfaAI | Sfr274I | Sfr303I |
| SgfI | SgrAI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SlaI | SmaI |
| SmiI | SpeI | SrfI | Sse8387I | SstI | SstII | SwaI |
| TspMI | Van91I | XagI | XhoI | XmaI | XmaCI | XmiI |
| XmnI | ZrmI |
pCMV-CD63-EGFP中的单酶切位点包括：
| AfeI | AflII | AflIII | AgeI | ApaLI | BamHI | BbsI |
| BbvCI | BmtI | BsaI | BspDI | BsrGI | BstBI | BstXI |
| ClaI | DraIII | EagI | FspI | HincII | HpaI | KasI |
| MfeI | MscI | NarI | NdeI | NheI | PciI | PflFI |
| PluTI | PstI | RsrII | SexAI | SfiI | SfoI | SnaBI |
| StuI | TspGWI | Tth111I | XbaI | XcmI |
pCMV-CD63-EGFP质粒推荐使用的测序引物序列如下：
CMV-F primer (519-539): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
pCMV-CD63-EGFP的全序列信息:D2839 pCMV-CD63-EGFP-全长序列.txt。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2839-1µg | pCMV-CD63-EGFP (外泌体示踪用) | 1µg |
| D2839-100µg | pCMV-CD63-EGFP (外泌体示踪用) | 100µg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
