pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用)
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产品编号 D2833-1μg
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¥ 888.00
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1μg 100μg
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pCMV-CD81-mCherry是碧云天自行研发的一种可以在哺乳动物细胞中通过CMV启动子表达人源CD81-mCherry融合蛋白的的质粒。本产品可用于外泌体的示踪研究,用于研究外泌体的形成、分泌、靶向和运输机制。该质粒带有卡那霉素(Kanamycin)抗性。

外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs),直径约为40-160nm,具有脂质双分子层结构,天然存在于血液、尿液、脑脊液,以及体外培养细胞的上清液中[1],几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。如图1所示,细胞膜内吞(Endocytosis)依次形成初级内体(Early sorting endosome, ESE)、次级内体(Late sorting endosome, LSE)和多囊泡体(Multivesicular body, MVB),其中多囊泡体包含腔内囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs)。多囊泡体与细胞膜融合形成外泌体,外泌体携带多种来自其母体细胞的成分(包括核酸、蛋白质、脂类和代谢物等)释放到胞外基质中[3]。外泌体可以被附近或远距离的细胞识别和融合,是细胞间进行相互调控的重要媒介,参与了癌症、神经退行性病变和炎症性疾病等多种疾病的发病过程,影响细胞多方面的功能[4-5]。

图1. 外泌体的形成原理及其携带的母体细胞的成分示意图。

外泌体标记标志蛋白(Protein biomarkers for exosome),也称外泌体蛋白标志物(Protein markers for exosome),可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体据库(ExoCarta, http://www.exocarta.org)统计来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现9769种蛋白质,ExoCarta列出了100种常见外泌体标记蛋白标志物((ExoCarta, http://exocarta.org/exosome_markers_new),其中CD9、CD63、CD81、Alix、Flotillin、Ceramide和Tumor susceptibility gene 101 (TSG101)是最常用的外泌体标志蛋白标志物(如图2所示[3])。CD81在人体中由CD81基因编码的蛋白质抗原,是跨膜四超家族(Transmembrane 4 superfamily)成员之一,为4次跨膜蛋白,大量存在于细胞外囊泡的表面,也会出现在普通的细胞膜表面。CD81是最常用的外泌体标志蛋白标志物之一,参与B、T细胞的粘附、形态、激活、增殖和分化等过程,此外,CD81还与病毒感染相关,尤其在丙型肝炎病毒侵入细胞过程中发挥着重要作用[6]。

图2. 常见的外泌体标志蛋白标志物示意图。

pCMV-CD81-mCherry质粒转染HEK293T细胞的效果如图3所示。

图3. 碧云天生产的pCMV-CD81-mCherry (D2833)质粒转染HEK293T细胞效果图。pCMV-CD81-mCherry质粒转染HEK293T细胞24小时后,经荧光显微镜观察。实际荧光强度会因实验仪器、检测条件的不同而存在差异,本图仅供参考。

pCMV-CD81-mCherry质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 61-568
human CD81 612-1319
mCherry 1335-2045
SV40 poly(A) signal 2163-2284
f1 ori 2291-2746
Ampicillin promoter 2773-2877
SV40 promoter 2879-3236
Neomycin/Kanamycin resistance gene 3271-4065
HSV TK poly(A) signal 4297-4344
ori 4673-5261

pCMV-CD81-mCherry质粒(5375bp)的图谱如下:

pCMV-CD81-mCherry质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2833 pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用).pdf

pCMV-CD81-mCherry中没有的酶切位点包括:

AbsI AccI Acc65I Acc113I AclI AcvI AhlI
AjiI AjuI ApaI AscI AsiSI Asp718I BaeI
BbrPI BcgI BcuI BglII BlpI BmcAI BmgBI
BoxI Bpu1102I BpvUI BsePI BsiWI Bsp68I Bsp120I
Bsp1720I BssHII BssNAI Bst1107I BstPAI BstZ17I BtrI
BtuMI CciNI CelII Cfr9I Cfr42I Ecl136II Eco32I
Eco53kI Eco72I EcoICRI EcoRI EcoRV FblI FseI
FspAI HindIII I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI KpnI
KspI MauBI MluI MreI MssI NotI NruI
PacI PaeR7I PalAI PauI Pfl23II PI-PspI PI-SceI
Ple19I PmaCI PmeI PmlI PpuMI PshAI Psp5II
Psp124BI Psp1406I PspCI PspLI PspOMI PspPPI PspXI
PsrI PteI PvuI RgaI RigI RruI SacI
SacII SalI SanDI ScaI SfaAI Sfr274I Sfr303I
SgfI SgrBI SgrDI SgsI SlaI SmaI SmiI
SpeI SrfI SstI SstII SwaI TspMI XhoI
XmaI XmaCI XmiI ZrmI

pCMV-CD81-mCherry中的单酶切位点包括:

AarI AfeI AflII AflIII AgeI AhdI AseI
BamHI BbvCI BmtI BsaI BsmBI BspEI BsrGI
BstBI BtsαI EagI Esp3I FspI HpaI MfeI
NdeI NheI PciI PflFI PflMI PstI RsrII
SbfI SexAI SfiI SgrAI SnaBI Tth111I XbaI

pCMV-CD81-mCherry质粒推荐使用的测序引物序列如下:

CMV-F primer (519-539): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'

mCherry-C-5 primer (1923-1943): 5'-GCCTACAACGTCAACATCAAG-3'

pCMV-CD81-mCherry的全序列信息:D2833 pCMV-CD81-mCherry-全长序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2833-1µg pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用) 1µg
D2833-100µg pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用) 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl,共400µl。可以直接用于转染细胞。
参考文献:
1.Metzelaar MJ, Wijngaard PL, Peters PJ, Sixma JJ, Nieuwenhuis HK, Clevers HC. J Biol Chem. 1991. 15; 266(5): 3239-45.
2.Luo W, Dai Y, Chen Z, Yue X, Andrade-Powell KC, Chang J. Commun Biol. 2020. 10; 3 (1): 114.
3.Kalluri R, LeBleu VS. Science. 2020. 367 (6478).
4.He C, Zheng S, Luo Y, Wang B. Theranostics. 2018. 1; 8 (1): 237-255.
5.Zhang Y, Bi J, Huang J, Tang Y, Du S, Li P. Int J Nanomedicine. 2020. 22; 15: 6917-6934.
6.Fénéant L, Levy S, Cocquerel L. CD81 and hepatitis C virus (HCV) infection. Viruses. 2014. 6(2):535-72.
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