pCMV-CD81-mCherry是碧云天自行研发的一种可以在哺乳动物细胞中通过CMV启动子表达人源CD81-mCherry融合蛋白的的质粒。本产品可用于外泌体的示踪研究，用于研究外泌体的形成、分泌、靶向和运输机制。该质粒带有卡那霉素(Kanamycin)抗性。
外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直径约为40-160nm，具有脂质双分子层结构，天然存在于血液、尿液、脑脊液，以及体外培养细胞的上清液中[1]，几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。如图1所示，细胞膜内吞(Endocytosis)依次形成初级内体(Early sorting endosome, ESE)、次级内体(Late sorting endosome, LSE)和多囊泡体(Multivesicular body, MVB)，其中多囊泡体包含腔内囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs)。多囊泡体与细胞膜融合形成外泌体，外泌体携带多种来自其母体细胞的成分(包括核酸、蛋白质、脂类和代谢物等)释放到胞外基质中[3]。外泌体可以被附近或远距离的细胞识别和融合，是细胞间进行相互调控的重要媒介，参与了癌症、神经退行性病变和炎症性疾病等多种疾病的发病过程，影响细胞多方面的功能[4-5]。
图1. 外泌体的形成原理及其携带的母体细胞的成分示意图。
外泌体标记标志蛋白(Protein biomarkers for exosome)，也称外泌体蛋白标志物(Protein markers for exosome)，可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体据库(ExoCarta, http://www.exocarta.org)统计来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现9769种蛋白质，ExoCarta列出了100种常见外泌体标记蛋白标志物((ExoCarta, http://exocarta.org/exosome_markers_new)，其中CD9、CD63、CD81、Alix、Flotillin、Ceramide和Tumor susceptibility gene 101 (TSG101)是最常用的外泌体标志蛋白标志物(如图2所示[3])。CD81在人体中由CD81基因编码的蛋白质抗原，是跨膜四超家族(Transmembrane 4 superfamily)成员之一，为4次跨膜蛋白，大量存在于细胞外囊泡的表面，也会出现在普通的细胞膜表面。CD81是最常用的外泌体标志蛋白标志物之一，参与B、T细胞的粘附、形态、激活、增殖和分化等过程，此外，CD81还与病毒感染相关，尤其在丙型肝炎病毒侵入细胞过程中发挥着重要作用[6]。
图2. 常见的外泌体标志蛋白标志物示意图。
pCMV-CD81-mCherry质粒转染HEK293T细胞的效果如图3所示。
图3. 碧云天生产的pCMV-CD81-mCherry (D2833)质粒转染HEK293T细胞效果图。pCMV-CD81-mCherry质粒转染HEK293T细胞24小时后，经荧光显微镜观察。实际荧光强度会因实验仪器、检测条件的不同而存在差异，本图仅供参考。
pCMV-CD81-mCherry质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 61-568 |
| human CD81 | 612-1319 |
| mCherry | 1335-2045 |
| SV40 poly(A) signal | 2163-2284 |
| f1 ori | 2291-2746 |
| Ampicillin promoter | 2773-2877 |
| SV40 promoter | 2879-3236 |
| Neomycin/Kanamycin resistance gene | 3271-4065 |
| HSV TK poly(A) signal | 4297-4344 |
| ori | 4673-5261 |
pCMV-CD81-mCherry质粒(5375bp)的图谱如下：
pCMV-CD81-mCherry质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2833 pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用).pdf。
pCMV-CD81-mCherry中没有的酶切位点包括：
| AbsI | AccI | Acc65I | Acc113I | AclI | AcvI | AhlI |
| AjiI | AjuI | ApaI | AscI | AsiSI | Asp718I | BaeI |
| BbrPI | BcgI | BcuI | BglII | BlpI | BmcAI | BmgBI |
| BoxI | Bpu1102I | BpvUI | BsePI | BsiWI | Bsp68I | Bsp120I |
| Bsp1720I | BssHII | BssNAI | Bst1107I | BstPAI | BstZ17I | BtrI |
| BtuMI | CciNI | CelII | Cfr9I | Cfr42I | Ecl136II | Eco32I |
| Eco53kI | Eco72I | EcoICRI | EcoRI | EcoRV | FblI | FseI |
| FspAI | HindIII | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI | KpnI |
| KspI | MauBI | MluI | MreI | MssI | NotI | NruI |
| PacI | PaeR7I | PalAI | PauI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI |
| Ple19I | PmaCI | PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI | Psp5II |
| Psp124BI | Psp1406I | PspCI | PspLI | PspOMI | PspPPI | PspXI |
| PsrI | PteI | PvuI | RgaI | RigI | RruI | SacI |
| SacII | SalI | SanDI | ScaI | SfaAI | Sfr274I | Sfr303I |
| SgfI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SlaI | SmaI | SmiI |
| SpeI | SrfI | SstI | SstII | SwaI | TspMI | XhoI |
| XmaI | XmaCI | XmiI | ZrmI |
pCMV-CD81-mCherry中的单酶切位点包括：
| AarI | AfeI | AflII | AflIII | AgeI | AhdI | AseI |
| BamHI | BbvCI | BmtI | BsaI | BsmBI | BspEI | BsrGI |
| BstBI | BtsαI | EagI | Esp3I | FspI | HpaI | MfeI |
| NdeI | NheI | PciI | PflFI | PflMI | PstI | RsrII |
| SbfI | SexAI | SfiI | SgrAI | SnaBI | Tth111I | XbaI |
pCMV-CD81-mCherry质粒推荐使用的测序引物序列如下：
CMV-F primer (519-539): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
mCherry-C-5 primer (1923-1943): 5'-GCCTACAACGTCAACATCAAG-3'
pCMV-CD81-mCherry的全序列信息:D2833 pCMV-CD81-mCherry-全长序列.txt。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2833-1µg | pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用) | 1µg |
| D2833-100µg | pCMV-CD81-mCherry (外泌体示踪用) | 100µg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
