pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达目的蛋白、增强绿色荧光蛋白EGFP和博来霉素(Zeocin)抗性基因的表达质粒。
本质粒含有的CMV启动子可以高效启动目的基因的表达，同时可以通过P2A共表达增强绿色荧光蛋白EGFP，便于通过EGFP的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。
图1. 碧云天pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。
本质粒在多克隆位点和EGFP的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和博来霉素(Zeocin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Zeocin (ST1450)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AmpR | 63-923 |
| AmpR promoter | 924-1016 |
| CMV enhancer | 1101-1404 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter | 1654-1672 |
| P2A | 1769-1834 |
| EGFP | 1835-2551 |
| HA | 2558-2584 |
| T7 promoter | 2639-2657 |
| SV40 poly(A) signal | 2931-3052 |
| f1 ori | 3059-3514 |
| AmpR promoter | 3541-3645 |
| SV40 promoter | 3647-4004 |
| SV40 ori | 3855-3990 |
| BleoR | 4039-4413 |
| HSV TK poly(A) signal | 4645-4692 |
| ori | 5021-5609 |
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo质粒(5717bp)的图谱如下：
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2828 pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo.pdf。
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AccIII | AccB7I | AcvI | AfeI | AgeI |
| AhlI | Aor13HI | Aor51HI | AscI | AsiGI | AsiSI | AspI |
| BaeI | BbeI | BbrPI | BbsI | BbvCI | BcuI | BlpI |
| BoxI | BpiI | Bpu1102I | BpuAI | BseAI | BshTI | BsiWI |
| Bsp13I | Bsp68I | Bsp1720I | BspEI | BspQI | BssNAI | Bst1107I |
| BstEII | BstENI | BstPI | BstPAI | BstV2I | BstZ17I | BtuMI |
| CelII | CpoI | CspI | CspAI | DinI | Eco47III | Eco72I |
| Eco91I | EcoNI | EcoO65I | EgeI | EheI | FspAI | I-CeuI |
| I-PpoI | I-SceI | KasI | Kpn2I | LguI | Mly113I | MreI |
| MroI | MssI | NarI | NruI | PalAI | PciSI | Pfl23II |
| PflFI | PflMI | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PluTI | PmaCI |
| PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI | Psp5II | PspCI | PspEI |
| PspLI | PspPPI | PspXI | PsrI | PsyI | RgaI | RsrII |
| Rsr2I | SanDI | SapI | SbfI | SdaI | SfaAI | SfoI |
| SgfI | SgrDI | SgsI | SmiI | SpeI | Sse8387I | SspDI |
| SwaI | Tth111I | Van91I | XagI | XcmI |
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo中的单酶切位点包括：
| AccI | GT'MK,AC | 1752 | MfeI | C'AATT,G | 2917 |
| AflII | C`TTAA,G | 2583 | MluI | A'CGCG,T | 3053 |
| AhdI | GACNN,N'NNGTC | 136 | MscI | TGG|CCA | 4042 |
| ApaI | G,GGCC'C | 2592 | NdeI | CA'TA,TG | 1274 |
| BamHI | G'GATC,C | 1721 | NheI | G'CTAG,C | 1631 |
| BclI | T'GATC,A | 2824 | NotI | GC'GGCC,GC | 1702 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN'NNNN, | 4465 | PaeR7I | C'TCGA,G | 1763 |
| BglII | A'GATC,T | 1757 | PciI | A'CATG,T | 5665 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1635 | PspOMI | G'GGCC,C | 2588 |
| BsmBI | CGTCTCN'NNNN, | 1803 | PstI | C,TGCA'G | 1737 |
| BspDI | AT'CG,AT | 4007 | PvuII | CAG|CTG | 3665 |
| BspMI | ACCTGCNNNN'NNNN, | 4465 | SacI | G,AGCT'C | 1689 |
| BsrGI | T'GTAC,A | 2544 | SacII | CC,GC'GG | 1696 |
| BssHII | G`CGCG,C | 4075 | SalI | G'TCGA,C | 1751 |
| BstBI | TT'CG,AA | 4429 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BstXI | CCAN,NNNN'NTGG | 1697 | SfiI | GGCCN,NNN'NGGCC | 3942 |
| ClaI | AT'CG,AT | 4007 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 4153 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAANNNNNGTGG(N)10,NN` | 1416 | SmaI | CCC|GGG | 1716 |
| EarI | CTCTTCN'NNN, | 931 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | SrfI | GCCC|GGGC | 1716 |
| EcoRI | G'AATT,C | 1739 | StuI | AGG|CCT | 3988 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1747 | TspMI | C'CCGG,G | 1714 |
| Esp3I | CGTCTCN'NNNN, | 1803 | XbaI | T'CTAG,A | 2552 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 4315 | XhoI | C'TCGA,G | 1763 |
| HindIII | A'AGCT,T | 1727 | XmaI | C'CCGG,G | 1714 |
| HpaI | GTT|AAC | 2930 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物EGFP primer的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
EGFP primer (1874-1890): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo的全序列信息:D2828 pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo全序列。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2828-1µg | pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo | 1µg |
| D2828-100µg | pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo | 100µg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
