pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达目的蛋白、红色荧光蛋白mCherry和潮霉素B (Hygromycin B)抗性基因的表达质粒。
本质粒含有的CMV启动子可以高效启动目的基因的表达，同时可以通过P2A共表达红色荧光蛋白mCherry，便于通过mCherry的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。
图1. 碧云天pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。
本质粒在多克隆位点和mCherry的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Hygromycin B (ST1389)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AmpR | 63-923 |
| AmpR promoter | 924-1016 |
| CMV enhancer | 1101-1404 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter | 1654-1672 |
| P2A | 1769-1834 |
| mCherry | 1835-2542 |
| HA | 2549-2575 |
| T7 promoter | 2630-2648 |
| SV40 poly(A) signal | 2922-3043 |
| f1 ori | 3050-3505 |
| AmpR promoter | 3532-3636 |
| SV40 promoter | 3638-3995 |
| SV40 ori | 3846-3981 |
| HygR | 4030-5055 |
| HSV TK poly(A) signal | 5287-5334 |
| ori | 5663-6251 |
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒(6539bp)的图谱如下：
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg的多克隆位点的详细图谱如下：https://www.beyotime.com/Manual/D2822 pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg.pdf。
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AcvI | AfeI | AgeI | AhlI | Aor51HI |
| AscI | AsiGI | BaeI | BbrPI | BcuI | BlpI | Bpu1102I |
| BsePI | BshTI | BsiWI | Bsp68I | Bsp1720I | BspQI | BssHII |
| BssNAI | Bst1107I | BstENI | BstZ17I | BtuMI | CelII | CspAI |
| Eco47III | Eco72I | EcoNI | FseI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI |
| I-SceI | LguI | MauBI | MreI | MssI | NruI | PalAI |
| PauI | PciSI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI |
| PmeI | PmlI | PpuMI | Psp5II | PspCI | PspLI | PspPPI |
| PspXI | PsrI | RigI | SanDI | SapI | SgrDI | SgsI |
| SmiI | SpeI | SwaI | XagI | |||
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg中的单酶切位点包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1752 | MluI | A`CGCG,T | 3044 |
| AflII | C,TTAA,G | 2574 | MscI | TGG|CCA | 1865 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2583 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 4394 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BamHI | G`GATC,C | 1721 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BbsI | GAAGACNN`NNNN, | 2270 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1763 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 2373 | PciI | A`CATG,T | 6307 |
| BcgI | ,NN`(N)10CGANNNNNNTGC(N)10,NN` | 641 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4534 |
| BclI | T`GATC,A | 2815 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 2274 |
| BglII | A`GATC,T | 1757 | PshAI | GACNN|NNGTC | 4057 |
| BmgBI | CAC|GTC | 1813 | PspOMI | G`GGCC,C | 2579 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1635 | RsrII | CG`GWC,CG | 4438 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 2373 | SacI | G,AGCT`C | 1689 |
| BsgI | GTGCAGNNNNNNNNNNNNNN,NN` | 2429 | SacII | CC,GC`GG | 1696 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 1803 | SalI | G`TCGA,C | 1751 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3998 | SbfI | CC,TGCA`GG | 2190 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 2535 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3933 |
| BstBI | TT`CG,AA | 5071 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 2516 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1697 | SmaI | CCC|GGG | 1716 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3998 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAANNNNNGTGG(N)10,NN` | 1416 | SrfI | GCCC|GGGC | 1716 |
| EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | TspMI | C`CCGG,G | 1714 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4534 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1739 | XbaI | T`CTAG,A | 2543 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1747 | XcmI | CCANNNN,N`NNNNTGG | 2521 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN, | 1803 | XhoI | C`TCGA,G | 1763 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1727 | XmaI | C`CCGG,G | 1714 |
| HpaI | GTT|AAC | 2921 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
| MfeI | C`AATT,G | 2908 |
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物mCherry primer的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
mCherry primer (1837-1853): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg的全序列信息：D2822 pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg 全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2822-1µg | pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg | 1µg |
| D2822-100µg | pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
