pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达目的蛋白、增强绿色荧光蛋白EGFP和博来霉素(Zeocin)抗性基因的表达质粒。
本质粒含有的CMV启动子可以高效启动目的基因的表达，同时可以通过P2A共表达增强绿色荧光蛋白EGFP，便于通过EGFP的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。
图1. 碧云天pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。
本质粒在多克隆位点和EGFP的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和博来霉素(Zeocin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Zeocin (ST1450)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AmpR | 63-923 |
| AmpR promoter | 924-1016 |
| CMV enhancer | 1101-1404 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter | 1654-1672 |
| P2A | 1769-1834 |
| EGFP | 1835-2551 |
| FLAG | 2558-2581 |
| T7 promoter | 26362654 |
| SV40 poly(A) signal | 2928-3049 |
| f1 ori | 3056-3511 |
| AmpR promoter | 3538-3642 |
| SV40 promoter | 3644-4001 |
| SV40 ori | 3852-3987 |
| BleoR | 4036-4410 |
| HSV TK poly(A) signal | 4642-4689 |
| ori | 5018-5606 |
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo质粒(5714bp)的图谱如下：
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo质粒(5714bp)的图谱如下：的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2813 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo,pdf。
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AccIII | AccB7I | AcvI | AfeI | AflII |
| AgeI | AhlI | Aor13HI | Aor51HI | AscI | AsiGI | AsiSI |
| AspI | BaeI | BbeI | BbrPI | BbsI | BbvCI | BcuI |
| BfrI | BlpI | BoxI | BpiI | Bpu1102I | BpuAI | BseAI |
| BshTI | BsiWI | Bsp13I | Bsp68I | Bsp1720I | BspEI | BspQI |
| BspTI | BssNAI | Bst98I | Bst1107I | BstAFI | BstEII | BstENI |
| BstPI | BstPAI | BstV2I | BstZ17I | BtuMI | CelII | CpoI |
| CspI | CspAI | DinI | Eco47III | Eco72I | Eco91I | EcoNI |
| EcoO65I | EgeI | EheI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI |
| KasI | Kpn2I | LguI | Mly113I | MreI | MroI | MspCI |
| MssI | NarI | NruI | PalAI | PciSI | Pfl23II | PflFI |
| PflMI | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PluTI | PmaCI | PmeI |
| PmlI | PpuMI | PshAI | Psp5II | PspCI | PspEI | PspLI |
| PspPPI | PspXI | PsrI | PsyI | RgaI | RsrII | Rsr2I |
| SanDI | SapI | SbfI | SdaI | SfaAI | SfoI | SgfI |
| SgrDI | SgsI | SmiI | SpeI | Sse8387I | SspDI | SwaI |
| Tth111I | Van91I | Vha464I | XagI | XcmI |
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo中的单酶切位点包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1752 | MfeI | C`AATT,G | 2914 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 136 | MluI | A`CGCG,T | 3050 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2589 | MscI | TGG|CCA | 4039 |
| BamHI | G`GATC,C | 1721 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| BbsI | GAAGACNN`NNNN, | 4121 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BclI | T`GATC,A | 2821 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 4486 | NruI | TCG|CGA | 4267 |
| BglII | A`GATC,T | 1757 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1763 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 4431 | PciI | A`CATG,T | 5686 |
| BmgBI | CAC|GTC | 1813 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4195 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1635 | PspOMI | G`GGCC,C | 2585 |
| BsaXI | ,NNN`(N)9ACNNNNNCTCC(N)7,NNN` | 3214 | PstI | C,TGCA`G | 1737 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 1803 | SacI | G,AGCT`C | 1689 |
| BspDI | AT`CG,AT | 4004 | SacII | CC,GC`GG | 1696 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 4486 | SalI | G`TCGA,C | 1751 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 2544 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BstBI | TT`CG,AA | 4450 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3939 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1697 | SmaI | CCC|GGG | 1716 |
| ClaI | AT`CG,AT | 4004 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 3280 | SrfI | GCCC|GGGC | 1716 |
| EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | StuI | AGG|CCT | 3985 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | TspMI | C`CCGG,G | 1714 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1739 | XbaI | T`CTAG,A | 2552 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1747 | XhoI | C`TCGA,G | 1763 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN, | 1803 | XmaI | C`CCGG,G | 1714 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1727 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
| HpaI | GTT|AAC | 2927 |
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物EGFP primer的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
EGFP primer (1837-1853): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'
pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo的全序列信息:D2813 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo全序列.txt。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2813-1µg | pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo | 1µg |
| D2813-100µg | pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo | 100µg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
