pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla
收藏
产品编号 D2807-1μg
数量
¥ 888.00
产品包装:
1μg 100μg
产品简介
使用说明
说明书下载
相关产品
相关论文
产品问答

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有HA标签(HA Tag, YPYDVPDYA)的目的蛋白、增强绿色荧光蛋白EGFP和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性基因的表达质粒。

本质粒含有CMV启动子可以高效启动目的基因的表达;可以方便地利用抗HA的抗体(AF5057/AF2305/AF0039/AH158)来检测目的蛋白;同时可以通过P2A共表达增强绿色荧光蛋白EGFP,便于通过EGFP的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。

图1. 碧云天pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。本图仅供参考,实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。

本质粒在多克隆位点和EGFP的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切,而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用,最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG),而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列,可提高剪切效率 [1,2]。

本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后,可使用Blasticidin S (ST018)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
AmpR 63-923
AmpR promoter 924-1016
CMV enhancer 1101-1404
CMV promoter 1405-1608
T3 promoter 1654-1672
HA 1712-1738
P2A 1808-1873
EGFP 1874-2593
T7 promoter 2645-2663
SV40 poly(A) signal 2937-3058
f1 ori 3065-3520
AmpR promoter 3547-3651
SV40 promoter 3653-4010
SV40 ori 3861-3996
BSD 4045-4443
HSV TK poly(A) signal 4675-4722
ori 5051-5639

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒(5747bp)的图谱如下:

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla的多克隆位点的详细图谱如下:https://www.beyotime.com/Manual/D2807 pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla.pdf

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla中没有的酶切位点包括:

AarI AbsI AccIII AcvI AfeI AflII AgeI
Aor13HI Aor51HI AscI AsiGI AsiSI AspI BaeI
BbeI BbrPI BbvCI BfrI BoxI BseAI BsePI
BshTI BsiWI Bsp13I BspEI BspQI BspTI BssHII
BssNAI Bst98I Bst1107I BstAFI BstEII BstENI BstPI
BstPAI BstXI BstZ17I Cfr42I CpoI CspI CspAI
DinI Eco47III Eco72I Eco91I EcoNI EcoO65I EgeI
EheI FseI FspAI I-CeuI I-PpoI I-SceI KasI
Kpn2I KspI LguI MauBI Mly113I MreI MroI
MspCI MssI NarI PalAI PauI PciSI Pfl23II
PflFI PI-PspI PI-SceI PinAI PluTI PmaCI PmeI
PmlI PshAI PspCI PspEI PspLI PspXI PsrI
PsyI RgaI RigI RsrII Rsr2I SacII SanDI
SapI SbfI SdaI SfaAI SfoI Sfr303I SgfI
SgrAI SgrBI SgrDI SgsI SmiI Sse8387I SspDI
SstII SwaI Tth111I Vha464I XagI XcmI

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla中的单酶切位点包括:

AccI GT`MK,AC 1779 MluI A`CGCG,T 3059
AhdI GACNN,N`NNGTC 136 MscI TGG|CCA 4048
ApaI G,GGCC`C 2598 NdeI CA`TA,TG 1274
BamHI G`GATC,C 1748 NotI GC`GGCC,GC 1701
BbsI GAAGACNN`NNNN, 4130 NruI TCG|CGA 4276
BclI T`GATC,A 2830 PaeR7I C`TCGA,G 1790
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 4495 PciI A`CATG,T 5695
BglII A`GATC,T 1784 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1696
BlpI GC`TNA,GC 4440 PpuMI RG`GWC,CY 4204
BmgBI CAC|GTC 1852 PpuMI RG`GWC,CY 4204
BsaXI ,NNN`(N)9ACNNNNNCTCC(N)7,NNN` 3223 PstI C,TGCA`G 1764
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 1842 SacI G,AGCT`C 1689
BspDI AT`CG,AT 4013 SalI G`TCGA,C 1778
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 4495 ScaI AGT|ACT 616
BsrGI T`GTAC,A 2583 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3948
BstBI TT`CG,AA 4459 SmaI CCC|GGG 1743
ClaI AT`CG,AT 4013 SnaBI TAC|GTA 1380
EarI CTCTTCN`NNN, 931 SpeI A`CTAG,T 1802
Eco53kI GAG|CTC 1687 SrfI GCCC|GGGC 1743
EcoRI G`AATT,C 1766 StuI AGG|CCT 3994
EcoRV GAT|ATC 1774 TspMI C`CCGG,G 1741
Esp3I CGTCTCN`NNNN, 1842 XbaI T`CTAG,A 1796
HindIII A`AGCT,T 1754 XhoI C`TCGA,G 1790
HpaI GTT|AAC 2936 XmaI C`CCGG,G 1741
MfeI C`AATT,G 2923 XmnI GAANN|NNTTC 735

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物EGFP primer的序列如下:

T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

EGFP primer (1876-1892): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'

pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla的全序列信息:D2807 pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla 全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2807-1µg pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla 1µg
D2807-100µg pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
参考文献:
1.Kim JH, Lee SR, Li LH, Park HJ, Park JH, et al. PLoS One. 2011. 6(4):e18556.
2.Ryan MD, King AM, Thomas GP. J Gen Virol. 1991. 72(11):2727-32.
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
ST018-10mg Blasticidin S HCl (灭瘟素S) 10mg
ST018-1ml Blasticidin S HCl (灭瘟素S) 10mg/ml×1ml
ST018-50mg Blasticidin S HCl (灭瘟素S) 50mg
ST018-5ml Blasticidin S HCl (灭瘟素S) 10mg/ml×5ml
C0533-0.5ml Lipo8000™转染试剂 0.5ml
C0533-1.5ml Lipo8000™转染试剂 1.5ml
C0533-7.5ml Lipo8000™转染试剂 7.5ml
D2633 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Neo 1µg/100µg
D2640 pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Neo 1µg/100µg
D2673 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Myc-Neo 1µg/100µg
D2723 pCMV-N-Flag-MCS-P2A-EGFP-Neo 1µg/100µg
D2734 pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Neo 1µg/100µg
D2738 pCMV-N-His-MCS-P2A-EGFP-Neo 1µg/100µg
D2757 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo 1µg/100µg
D2795 pCMV-N-Flag-MCS-P2A-mCherry-Hyg 1µg/100µg
D2796 pCMV-N-HA-MCS-P2A-mCherry-Hyg 1µg/100µg
D2797 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-mCherry-Hyg 1µg/100µg
D2798 pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg 1µg/100µg
D2799 pCMV-N-Flag-MCS-P2A-mCherry-Pur 1µg/100µg
D2801 pCMV-N-HA-MCS-P2A-mCherry-Pur 1µg/100µg
D2803 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-mCherry-Pur 1µg/100µg
D2808 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla 1µg/100µg
D2809 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Bla 1µg/100µg
D2810 pCMV-N-Flag-MCS-P2A-EGFP-Zeo 1µg/100µg
D2811 pCMV-N-HA-MCS-P2A-EGFP-Zeo 1µg/100µg
D2812 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Zeo 1µg/100µg
D2813 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Flag-Zeo 1µg/100µg
D2814 pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla 1µg/100µg
D2819 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Myc-Bla 1µg/100µg
D2822 pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg 1µg/100µg
D2823 pCMV-MCS-P2A-mCherry-Myc-Hyg 1µg/100µg
D2824 pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Pur 1µg/100µg
D2825 pCMV-MCS-P2A-mCherry-Myc-Pur 1µg/100µg
D2826 pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Pur 1µg/100µg
D2827 pCMV-N-Flag-MCS-P2A-EGFP-Bla 1µg/100µg
D2828 pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Zeo 1µg/100µg
D2829 pCMV-MCS-P2A-EGFP-Myc-Zeo 1µg/100µg
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献: