pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达目的蛋白、红色荧光蛋白mCherry和潮霉素B (Hygromycin B)抗性基因的表达质粒。
本质粒含有的CMV启动子可以高效启动目的基因的表达，同时可以通过P2A共表达红色荧光蛋白mCherry，便于通过mCherry的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。
图1. 碧云天pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。
本质粒在多克隆位点和mCherry的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Hygromycin B (ST1389)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AmpR | 63-923 |
| AmpR promoter | 924-1016 |
| CMV enhancer | 1101-1404 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter | 1654-1672 |
| P2A | 1769-1834 |
| mCherry | 1835-2542 |
| FLAG | 2549-2572 |
| T7 promoter | 2627-2645 |
| SV40 poly(A) signal | 2919-3040 |
| f1 ori | 3047-3502 |
| AmpR promoter | 3529-3633 |
| SV40 promoter | 3635-3992 |
| SV40 ori | 3843-3978 |
| HygR | 4027-5052 |
| HSV TK poly(A) signal | 5284-5331 |
| ori | 5660-6248 |
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg质粒(6356bp)的图谱如下：
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2798 pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg.pdf。
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AcvI | AfeI | AflII | AgeI | AhlI |
| Aor51HI | AscI | AsiGI | BaeI | BbrPI | BcuI | BfrI |
| BlpI | Bpu1102I | BsePI | BshTI | BsiWI | Bsp68I | Bsp1720I |
| BspQI | BspTI | BssHII | BssNAI | Bst98I | Bst1107I | BstAFI |
| BstENI | BstZ17I | BtuMI | CelII | CspAI | Eco47III | Eco72I |
| EcoNI | FseI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | LguI |
| MauBI | MreI | MspCI | MssI | NruI | PalAI | PauI |
| PciSI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI |
| PmlI | PpuMI | Psp5II | PspCI | PspLI | PspPPI | PspXI |
| PsrI | RigI | SanDI | SapI | SgrDI | SgsI | SmiI |
| SpeI | SwaI | Vha464I | XagI |
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg中的单酶切位点包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1752 | MluI | A`CGCG,T | 3041 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2580 | MscI | TGG|CCA | 1865 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 4391 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| BamHI | G`GATC,C | 1721 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BbsI | GAAGACNN`NNNN, | 2270 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 2373 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1763 |
| BcgI | ,NN`(N)10CGANNNNNNTGC(N)10,NN` | 641 | PciI | A`CATG,T | 6304 |
| BclI | T`GATC,A | 2812 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4531 |
| BglII | A`GATC,T | 1757 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 2274 |
| BmgBI | CAC|GTC | 1813 | PshAI | GACNN|NNGTC | 4054 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1635 | PspOMI | G`GGCC,C | 2576 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 2373 | RsrII | CG`GWC,CG | 4435 |
| BsgI | GTGCAGNNNNNNNNNNNNNN,NN` | 2429 | SacI | G,AGCT`C | 1689 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 1803 | SacII | CC,GC`GG | 1696 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3995 | SalI | G`TCGA,C | 1751 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 2535 | SbfI | CC,TGCA`GG | 2190 |
| BstBI | TT`CG,AA | 5068 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3930 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1697 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 2516 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3995 | SmaI | CCC|GGG | 1716 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAANNNNNGTGG(N)10,NN` | 1416 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | SrfI | GCCC|GGGC | 1716 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | TspMI | C`CCGG,G | 1714 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1739 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4531 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1747 | XbaI | T`CTAG,A | 2543 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN, | 1803 | XcmI | CCANNNN,N`NNNNTGG | 2521 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1727 | XhoI | C`TCGA,G | 1763 |
| HpaI | GTT|AAC | 2918 | XmaI | C`CCGG,G | 1714 |
| MfeI | C`AATT,G | 2905 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物mCherry primer的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
mCherry primer (1837-1853): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'
pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg的全序列信息:D2798 pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg.txt。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2798-1µg | pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg | 1µg |
| D2798-100µg | pCMV-MCS-P2A-mCherry-Flag-Hyg | 100µg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
