pCMV-N-Myc-Pur
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产品编号 D2791-1μg
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¥ 888.00
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1μg 100μg
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pCMV-N-Myc-Pur是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Myc标签(Myc tag)的目的蛋白的表达质粒。质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5′端含有一个编码Myc标签的序列,可以表达含有Myc标签的融合蛋白,因此可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。

pCMV-N-Myc-Pur质粒为氨苄青霉素抗性和嘌呤霉素(Puromycin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可利用其Puromycin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Puromycin (ST551)可以从碧云天购买。

Puromycin是来源于白黑链霉菌的一种氨基苷类抗生素,可通过打乱核糖体上的肽转运,造成翻译过程中不成熟终止,从而抑制蛋白质合成,抑制或杀死细胞。链霉菌(Streptomyces alboniger)来源的pac基因所编码的嘌呤霉素N-乙酰转移酶 (Puromycin N-acetyl-tranferase)可以催化Puromycin发生乙酰化修饰而失活,使细胞对Puromycin产生抗性。因此,Puromycin可用来筛选成功转染携带Puromycin抗性基因质粒的原核或真核细胞。

Puromycin是一种强效翻译抑制剂,作用迅速。一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞,通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Puromycin抗性的稳定哺乳动物细胞系。推荐工作浓度范围为0.5-5μg/ml,实际使用时应针对不同的细胞系测试Puromycin的浓度梯度,以确定最佳使用浓度。

pCMV-N-Myc-Pur质粒(5166bp)的图谱如下:

pCMV-N-Myc-Pur质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Ampicillin resistance ORF 63-923
CMV promoter 1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site 1654-1672
myc epitope 1713-1742
Multiple cloning site (XmaI-ApaI) 1745-1817
T7 promoter and T7 primer binding site 1863-1881
SV40 polyA signal 2155-2276
f1 origin of ss-DNA replication 2283-2738
SV40 promoter 2871-3228
Puromycin resistance ORF 3263-3862
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 4094-4141
pUC origin 4470-5058

pCMV-N-Myc-Pur的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2791 pCMV-N-Myc-Pur.pdf

pCMV-N-Myc-Pur中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Myc-Pur)包括:

Afe I Afl II Age I Asc I AsiS I Bae I
Bbs I BbvC I Blp I BmgB I Bsg I BspQ I
BsrG I BstZ17 I EcoN I Fse I Nru I PflM I
Pme I Pml I PpuM I PshA I PspX I Sap I
Sbf I SgrA I Swa I Xcm I

pCMV-N-Myc-Pur中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Myc-Pur once)包括:

AccI GT`MK,AC 1783 MscI TGG|CCA 3638
AhdI GACNN,N`NNGTC 135 MfeI C`AATT,G 2141
AleI CACNN|NNGTG 1695 MluI A`CGCG,T 2277
ApaI G,GGCC`C 1812 NdeI CA`TA,TG 1274
BamHI G`GATC,C 1752 NheI G`CTAG,C 1631
BclI T`GATC,A 2048 NotI GC`GGCC,GC 1702
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN 3914 PaeR7I C`TCGA,G 1794
BglII A`GATC,T 1788 PciI A`CATG,T 5114
BmtI G,CTAG`C 1631 PflFI GACN`N,NGTC 3305
Bpu10I CC`TNA,GC 3859 PspOMI G`GGCC,C 1812
BseRI GAGGAG(N)8,NN 3207 PstI C,TGCA`G 1764
BsiWI C`GTAC,G 3319 PvuII CAG|CTG 2889
BsmBI CGTCTCN`NNNN 3655 RsrII CG`GWC,CG 3379
BspDI AT`CG,AT 3231 SacI G,AGCT`C 1685
BspEI T`CCGG,A 3376 SalI G`TCGA,C 1782
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN 3914 ScaI AGT|ACT 616
BssHII G`CGCG,C 3718 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3163
BstBI TT`CG,AA 3878 SmaI CCC|GGG 1747
BstEII G`GTNAC,C 3397 SnaBI TAC|GTA 1380
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 1693 SpeI A`CTAG,T 1806
ClaI AT`CG,AT 3231 SrfI GCCC|GGGC 1747
CspCI NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 1414 TspMI C`CCGG,G 1745
Eco53kI GAG|CTC 1687 Tth111I GACN`N,NGTC 3305
EcoRI G`AATT,C 1770 XbaI T`CTAG,A 1800
EcoRV GAT|ATC 1778 XhoI C`TCGA,G 1794
Esp3I CGTCTCN`NNNN 3655 XmaI C`CCGG,G 1745
HindIII A`AGCT,T 1758 XmnI GAANN|NNTTC 735
HpaI GTT|AAC 2154

pCMV-N-Myc-Pur质粒中对插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:

T3 primer (1654-1672): 5’ AATTAACCCTCACTAAAGG 3’

T7 primer (1863-1881): 5’ TAATACGACTCACTATAGG 3’

pCMV-N-Myc-Pur的全序列信息:D2791 pCMV-N-Myc-Pur-seq.txt

不同真核表达质粒的比较和选择,以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页:

https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2791-1μg pCMV-N-Myc-Pur 1μg
D2791-100μg pCMV-N-Myc-Pur 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pCMV-N-Myc-Pur质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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