pCMV-N-Myc-Zeo
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产品编号 D2785-1μg
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¥ 888.00
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1μg 100μg
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pCMV-N-Myc-Zeo是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Myc标签(Myc Tag)的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5′端含有一个编码Myc标签的序列,可以表达含有Myc标签的融合蛋白,因此可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,从而有利于目的蛋白的检测和分离纯化。

pCMV-N-Myc-Zeo质粒为氨苄青霉素抗性和Zeocin(博来霉素)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染细胞后,可利用其Zeocin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Zeocin (ST1450)可以从碧云天购买。

Zeocin是来源于轮枝链霉素(Streptomyces verticillus)的一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。当Zeocin进入细胞后,与其螯合的Cu2+被还原并被细胞内巯基化合物去除,导致Zeocin被活化,嵌入细胞DNA使其断裂,并最终导致细胞死亡。印度链异壁菌(Streptoalloteichus hindustanus)来源的Sh ble基因编码一种14kDa大小的蛋白,能够以化学计量方式结合Zeocin,抑制其DNA双链断裂活性,使细胞对Zeocin产生抗性。因此,Zeocin可用来筛选成功转染携带Sh ble基因质粒的原核或真核细胞。

Zeocin筛选浓度范围为50-1000μg/ml,实际使用时应针对不同的细胞系测试Zeocin的浓度梯度,以确定最佳使用浓度。

pCMV-N-Myc-Zeo质粒(4941bp)的图谱如下:

pCMV-N-Myc-Zeo质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Ampicillin resistance ORF 63-923
CMV promoter 1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site 1654-1672
myc epitope 1713-1742
Multiple cloning site (XmaI-ApaI) 1745-1817
T7 promoter and T7 primer binding site 1863-1881
SV40 polyA signal 2155-2276
f1 origin of ss-DNA replication 2283-2738
SV40 promoter 2871-3228
Zeocin™ resistance ORF 3263-3637
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3869-3916
pUC origin 4245-4833

pCMV-N-Myc-Zeo的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2785 pCMV-N-Myc-Zeo.pdf

pCMV-N-Myc-Zeo中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Myc-Zeo)包括:

Afe I Afl II Age I Asc I AsiS I Bae I
Bbs I BbvC I Blp I Bpu10 I Bsg I BsiW I
BsmB I BspE I BspQ I BsrG I BstE II BstZ17 I
EcoN I Esp3 I Kas I Nar I Nru I PflF I
PflM I PluT I Pme I Pml I PpuM I PshA I
PspX I Rsr II Sap I Sbf I Sfo I Swa I
Tth111 I Xcm I

pCMV-N-Myc-Zeo中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Myc-Zeo once)包括:

AccI GT`MK,AC 1783 MscI TGG|CCA 3266
AhdI GACNN,N`NNGTC 135 NdeI CA`TA,TG 1274
AleI CACNN|NNGTG 1695 NheI G`CTAG,C 1631
ApaI G,GGCC`C 1812 NotI GC`GGCC,GC 1702
BamHI G`GATC,C 1752 PaeR7I C`TCGA,G 1794
BcgI NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 639 PciI A`CATG,T 4889
BclI T`GATC,A 2048 PspOMI G`GGCC,C 1812
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN 3689 PstI C,TGCA`G 1764
BglII A`GATC,T 1788 PvuII CAG|CTG 2889
BmgBI CAC|GTC 3397 SacI G,AGCT`C 1685
BmtI G,CTAG`C 1631 SacII CC,GC`GG 1694
BspDI AT`CG,AT 3231 SalI G`TCGA,C 1782
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN 3689 ScaI AGT|ACT 616
BssHII G`CGCG,C 3299 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3163
BstBI TT`CG,AA 3653 SgrAI CR`CCGG,YG 3377
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 1693 SmaI CCC|GGG 1747
ClaI AT`CG,AT 3231 SnaBI TAC|GTA 1380
CspCI NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 1414 SpeI A`CTAG,T 1806
Eco53kI GAG|CTC 1687 SrfI GCCC|GGGC 1747
EcoRI G`AATT,C 1770 StuI AGG|CCT 3212
EcoRV GAT|ATC 1778 TspMI C`CCGG,G 1745
FseI GG,CCGG`CC 3535 XbaI T`CTAG,A 1800
HindIII A`AGCT,T 1758 XhoI C`TCGA,G 1794
HpaI GTT|AAC 2154 XmaI C`CCGG,G 1745
MfeI C`AATT,G 2141 XmnI GAANN|NNTTC 735
MluI A`CGCG,T 2277

pCMV-N-Myc-Zeo质粒中对插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:

T3 primer (1654-1672): 5’ AATTAACCCTCACTAAAGG 3’

T7 primer (1863-1881): 5’ TAATACGACTCACTATAGG 3’

pCMV-N-Myc-Zeo的全序列信息:D2785 pCMV-N-Myc-Zeo-seq.txt

不同真核表达质粒的比较和选择,以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页:

https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2785-1μg pCMV-N-Myc-Zeo 1μg
D2785-100μg pCMV-N-Myc-Zeo 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pCMV-N-Myc-Zeo质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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