pCMV-N-HA-Zeo是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有HA标签(HA Tag, YPYDVPDYA)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码HA标签的序列，可以表达含有HA标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白的检测和分离纯化。

pCMV-N-HA-Zeo质粒为氨苄青霉素抗性和Zeocin(博来霉素)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染细胞后，可利用其Zeocin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Zeocin (ST1450)可以从碧云天购买。

Zeocin是来源于轮枝链霉素(Streptomyces verticillus)的一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。当Zeocin进入细胞后，与其螯合的Cu²⁺被还原并被细胞内巯基化合物去除，导致Zeocin被活化，嵌入细胞DNA使其断裂，并最终导致细胞死亡。印度链异壁菌(Streptoalloteichus hindustanus)来源的Sh ble基因编码一种14kDa大小的蛋白，能够以化学计量方式结合Zeocin，抑制其DNA双链断裂活性，使细胞对Zeocin产生抗性。因此，Zeocin可用来筛选成功转染携带Sh ble基因质粒的原核或真核细胞。

Zeocin筛选浓度范围为50-1000μg/ml，实际使用时应针对不同的细胞系测试Zeocin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。

pCMV-N-HA-Zeo质粒(4937bp)的图谱如下：

pCMV-N-HA-Zeo质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
Ampicillin resistance ORF	63-923
CMV promoter	1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site	1654-1672
HA tag	1712-1738
Multiple cloning site (XmaI-ApaI)	1741-1813
T7 promoter and T7 primer binding site	1859-1877
SV40 polyA signal	2151-2272
f1 origin of ss-DNA replication	2279-2734
SV40 promoter	2867-3224
Zeocin™ resistance ORF	3259-3633
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3865-3912
pUC origin	4241-4829

pCMV-N-HA-Zeo的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2784 pCMV-N-HA-Zeo.pdf

pCMV-N-HA-Zeo中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA-Zeo)包括：

Afe I	Afl II	Age I	Ale I	Asc I	AsiS I
Bae I	Bbs I	BbvC I	Blp I	Bpu10 I	Bsg I
BsiW I	BsmB I	BspE I	BspQ I	BsrG I	BstE II
BstX I	BstZ17 I	EcoN I	Esp3 I	Kas I	Nar I
Nru I	PflF I	PluT I	Pme I	Pml I	PpuM I
PshA I	PspX I	Rsr II	Sac II	Sap I	Sbf I
Sfo I	Swa I	Tth111 I	Xcm I

pCMV-N-HA-Zeo中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA-Zeo once)包括：

AccI	GT`MK,AC	1779	MscI	TGG|CCA	3262
AhdI	GACNN,N`NNGTC	135	NdeI	CA`TA,TG	1274
ApaI	G,GGCC`C	1808	NotI	GC`GGCC,GC	1701
BamHI	G`GATC,C	1748	PaeR7I	C`TCGA,G	1790
BcgI	NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	639	PciI	A`CATG,T	4885
BclI	T`GATC,A	2044	PflMI	CCAN,NNN`NTGG	1693
BfuAI	ACCTGCNNNN`NNNN	3685	PspOMI	G`GGCC,C	1808
BglII	A`GATC,T	1784	PstI	C,TGCA`G	1760
BmgBI	CAC|GTC	3393	PvuII	CAG|CTG	2885
BspDI	AT`CG,AT	3227	SacI	G,AGCT`C	1685
BspMI	ACCTGCNNNN`NNNN	3685	SalI	G`TCGA,C	1778
BssHII	G`CGCG,C	3295	ScaI	AGT|ACT	616
BstBI	TT`CG,AA	3649	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3159
ClaI	AT`CG,AT	3227	SgrAI	CR`CCGG,YG	3373
CspCI	NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	1414	SmaI	CCC|GGG	1743
EarI	CTCTTCN`NNN,	931	SnaBI	TAC|GTA	1380
Eco53kI	GAG|CTC	1687	SpeI	A`CTAG,T	1802
EcoRI	G`AATT,C	1766	SrfI	GCCC|GGGC	1743
EcoRV	GAT|ATC	1774	StuI	AGG|CCT	3208
FseI	GG,CCGG`CC	3531	TspMI	C`CCGG,G	1741
HindIII	A`AGCT,T	1754	XbaI	T`CTAG,A	1796
HpaI	GTT|AAC	2150	XhoI	C`TCGA,G	1790
MfeI	C`AATT,G	2137	XmaI	C`CCGG,G	1741
MluI	A`CGCG,T	2273	XmnI	GAANN|NNTTC	735

pCMV-N-HA-Zeo质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

T7 primer (1859-1877): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'

pCMV-N-HA-Zeo的全序列信息:D2784 pCMV-N-HA-Zeo-seq.txt

不同真核表达质粒的比较和选择，以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页：

https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D2784-1μg	pCMV-N-HA-Zeo	1μg
D2784-100μg	pCMV-N-HA-Zeo	100μg
－	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pCMV-N-HA-Zeo质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
ST1450-20mg	Zeocin (博莱霉素)	20mg
ST1450-100mg	Zeocin (博莱霉素)	100mg
ST1450-0.25ml	Zeocin (博莱霉素)	20mg/ml×0.25ml
ST1450-1ml	Zeocin (博莱霉素)	20mg/ml×1ml
D2771-1μg	pCMV-N-Flag-Bla	1μg
D2771-100μg	pCMV-N-Flag-Bla	100μg
D2772-1μg	pCMV-N-HA-Bla	1μg
D2772-100μg	pCMV-N-HA-Bla	100μg
D2773-1μg	pCMV-N-Myc-Bla	1μg
D2773-100μg	pCMV-N-Myc-Bla	100μg
D2774-1μg	pCMV-C-Flag-Bla	1μg
D2774-100μg	pCMV-C-Flag-Bla	100μg
D2775-1μg	pCMV-C-HA-Bla	1μg
D2775-100μg	pCMV-C-HA-Bla	100μg
D2776-1μg	pCMV-C-Myc-Bla	1μg
D2776-100μg	pCMV-C-Myc-Bla	100μg
D2777-1μg	pCMV-N-Flag-Hyg	1μg
D2777-100μg	pCMV-N-Flag-Hyg	100μg
D2778-1μg	pCMV-N-HA-Hyg	1μg
D2778-100μg	pCMV-N-HA-Hyg	100μg
D2779-1μg	pCMV-N-Myc-Hyg	1μg
D2779-100μg	pCMV-N-Myc-Hyg	100μg
D2780-1μg	pCMV-C-Flag-Hyg	1μg
D2780-100μg	pCMV-C-Flag-Hyg	100μg
D2781-1μg	pCMV-C-HA-Hyg	1μg
D2781-100μg	pCMV-C-HA-Hyg	100μg
D2782-1μg	pCMV-C-Myc-Hyg	1μg
D2782-100μg	pCMV-C-Myc-Hyg	100μg
D2783-1μg	pCMV-N-Flag-Zeo	1μg
D2783-100μg	pCMV-N-Flag-Zeo	100μg
D2784-1μg	pCMV-N-HA-Zeo	1μg
D2784-100μg	pCMV-N-HA-Zeo	100μg
D2785-1μg	pCMV-N-Myc-Zeo	1μg
D2785-100μg	pCMV-N-Myc-Zeo	100μg
D2786-1μg	pCMV-C-Flag-Zeo	1μg
D2786-100μg	pCMV-C-Flag-Zeo	100μg
D2787-1μg	pCMV-C-HA-Zeo	1μg
D2787-100μg	pCMV-C-HA-Zeo	100μg
D2788-1μg	pCMV-C-Myc-Zeo	1μg
D2788-100μg	pCMV-C-Myc-Zeo	100μg
D2789-1μg	pCMV-N-Flag-Pur	1μg
D2789-100μg	pCMV-N-Flag-Pur	100μg
D2790-1μg	pCMV-N-HA-Pur	1μg
D2790-100μg	pCMV-N-HA-Pur	100μg
D2791-1μg	pCMV-N-Myc-Pur	1μg
D2791-100μg	pCMV-N-Myc-Pur	100μg
D2792-1μg	pCMV-C-Flag-Pur	1μg
D2792-100μg	pCMV-C-Flag-Pur	100μg
D2793-1μg	pCMV-C-HA-Pur	1μg
D2793-100μg	pCMV-C-HA-Pur	100μg
D2794-1μg	pCMV-C-Myc-Pur	1μg
D2794-100μg	pCMV-C-Myc-Pur	100μg
D2632-1μg	pCMV-C-Flag	1μg
D2632-100μg	pCMV-C-Flag	100μg
D2639-1μg	pCMV-C-HA	1μg
D2639-100μg	pCMV-C-HA	100μg
D2650-1μg	pCMV-C-His	1μg
D2650-100μg	pCMV-C-His	100μg
D2672-1μg	pCMV-C-Myc	1μg
D2672-100μg	pCMV-C-Myc	100μg
D2722-1μg	pCMV-N-Flag	1μg
D2722-100μg	pCMV-N-Flag	100μg
D2733-1μg	pCMV-N-HA	1μg
D2733-100μg	pCMV-N-HA	100μg
D2737-1μg	pCMV-N-His	1μg
D2737-100μg	pCMV-N-His	100μg
D2756-1μg	pCMV-N-Myc	1μg
D2756-100μg	pCMV-N-Myc	100μg