pCMV-C-Flag-Bla
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产品编号 D2774-100μg
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¥ 1169.00
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1μg 100μg
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pCMV-C-Flag-Bla是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端带有Flag标签(Flag Tag,DYKDDDDK)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3′端含有一个编码Flag标签的序列,可以表达带有Flag标签的融合蛋白,因此可以方便地利用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。

pCMV-C-Flag-Bla质粒为氨苄青霉素抗性和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌;而在转染哺乳动物细胞后,可利用其Blasticidin S抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Blasticidin S (ST018)可以从碧云天购买。

Blasticidin S是来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一种核苷类抗生素,中文名为灭瘟素S、杀稻瘟菌素S或稻瘟散。Blasticidin S特异性地抑制原核细胞或真核细胞的蛋白质合成,从而杀死细胞。Blasticidin S抗性基因(bsr/BSD/bls)所编码的Blasticidin S脱氨酶可以催化Blasticidin S发生脱氨基反应生成对细胞无毒性的Blasticidin S脱氨羟基化衍生物,从而使细胞对Blasticidin S产生抗性。因此,Blasticidin S可用于筛选携带bsr/BSD/bls基因(常标记为bsrr/bsdr/Blastr)质粒的哺乳动物稳定转染细胞株,也可用于大肠杆菌等原核细胞的筛选。

Blasticidin S具有快速而强效的作用模式,通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Blasticidin S抗性的稳定哺乳动物细胞系。工作浓度范围1-50μg/ml,通常建议使用10μg/ml的浓度进行稳定哺乳动物细胞株的筛选,实际使用时应针对不同的细胞系测试Blasticidin S的浓度梯度,以确定最佳使用浓度。

pCMV-C-Flag-Bla质粒(4955bp)的图谱如下:

pCMV-C-Flag-Bla质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Ampicillin resistance ORF 63-923
CMV promoter 1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site 1654-1672
Flag tag 1775-1798
Multiple cloning site (SacI-XbaI) 1685-1774
T7 promoter and T7 primer binding site 1853-1871
SV40 polyA signal 2145-2266
f1 origin of ss-DNA replication 2273-2728
SV40 promoter 2861-3218
Blasticidin resistance ORF 3253-3651
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3883-3930
pUC origin 4259-4847

pCMV-C-Flag-Bla的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2774 pCMV-C-Flag-Bla.pdf

pCMV-C-Flag-Bla中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-Flag-Bla)包括:

Afe I Afl II Age I Asc I AsiS I Bae I 
BbvC I BmgB I Bpu10 I BsiW I BsmB I BspE I 
BspQ I BsrG I BssH II BstE II BstZ17 I EcoN I
Esp3 I Fse I Kas I Nar I PflF I PflM I
PluT I Pme I Pml I PshA I PspX I Rsr II
Sap I Sbf I Sfo I SgrA I Spe I Swa I
Tth111 I Xcm I

pCMV-C-Flag-Bla中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-Flag-Bla once)包括:

AccI GT`MK,AC 1752 MfeI C`AATT,G 2131
AhdI GACNN,N`NNGTC 135 MluI A`CGCG,T 2267
AleI CACNN|NNGTG 1695 MscI TGG|CCA 3256
ApaI G,GGCC`C 1802 NdeI CA`TA,TG 1274
BamHI G`GATC,C 1721 NheI G`CTAG,C 1631
BbsI GAAGACNN`NNNN, 3338 NotI GC`GGCC,GC 1702
BcgI NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 639 NruI TCG|CGA 3484
BclI T`GATC,A 2038 PaeR7I C`TCGA,G 1763
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 3703 PciI A`CATG,T 4903
BglII A`GATC,T 1757 PpuMI RG`GWC,CY 3412
BlpI GC`TNA,GC 3648 PspOMI G`GGCC,C 1802
BmtI G,CTAG`C 1631 PstI C,TGCA`G 1733
BsaXI NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 2428 SacI G,AGCT`C 1685
BseRI GAGGAG(N)8,NN` 3197 SacII CC,GC`GG 1694
BsgI GTGCAG(N)14,NN` 3438 SalI G`TCGA,C 1751
BspDI AT`CG,AT 3221 ScaI AGT|ACT 616
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 3703 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3153
BstBI TT`CG,AA 3667 SmaI CCC|GGG 1716
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 1693 SnaBI TAC|GTA 1380
ClaI AT`CG,AT 3221 SrfI GCCC|GGGC 1716
DraIII CAC,NNN`GTG 2494 StuI AGG|CCT 3202
EarI CTCTTCN`NNN, 931 TspMI C`CCGG,G 1714
Eco53kI GAG|CTC 1687 XbaI T`CTAG,A 1769
EcoRI G`AATT,C 1739 XhoI C`TCGA,G 1763
EcoRV GAT|ATC 1747 XmaI C`CCGG,G 1714
HindIII A`AGCT,T 1727 XmnI GAANN|NNTTC 735
HpaI GTT|AAC 2144

pCMV-C-Flag-Bla质粒中对插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:

T3 primer (1654-1672): 5’ AATTAACCCTCACTAAAGG 3’

T7 primer (1853-1871): 5’ TAATACGACTCACTATAGG 3’

pCMV-C-Flag-Bla的全序列信息:D2774 pCMV-C-Flag-Bla-seq.txt

不同真核表达质粒的比较和选择,以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页:

https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2774-1μg pCMV-C-Flag-Bla 1μg
D2774-100μg pCMV-C-Flag-Bla 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pCMV-C-Flag-Bla质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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