pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒)
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产品编号 D2764-100μg
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pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)萤光素酶报告基因检测的质粒。该报告基因质粒在pRL-SV40-N (D2762)的基础上进行了改造,使用了蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原Renilla luciferase进行了替换,其主要用于在其多克隆位点插入感兴趣的5'-UTR、启动子或增强子等调控元件以研究该调控序列的基因转录调控活性。可以使用BglII和多克隆位点切除SV40 early enhancer/promoter,以降低本底的转录,并插入感兴趣的5'-UTR等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。研究3'-UTR并希望使用Gaussia Luciferase萤光素酶时,推荐使用pGLuc-Dura-SV40-C (D2770)。

Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时,无需裂解细胞,可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。

Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比,使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势:分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;发光强度高,是其它萤光素酶的1000倍;反应无须ATP,不受ATP影响;稳定性高,对温度、pH值等耐受性强。

与野生型Gaussia Luciferase相比,突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时,不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点,还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。

pGLuc-Dura-SV40-N质粒含有SV40早期增强子和启动子,可以实现Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶在哺乳动物细胞内的高效表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pGLuc-Dura-SV40-N质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
SV40 early enhancer/promoter 7-418
Multiple cloning site 426-480
Chimeric intron 546-682
T7 RNA polymerase transcription (-17 to +2) 726-744
T7 RNA polymerase transcription initiation site 743
Gluc (MT) reporter gene 754-1311
SV40 late polyadenylation signal 1352-1533
β-lactamase (Ampr) coding region 1700-2560

pGLuc-Dura-SV40-N质粒(3386bp)的图谱如下:

pGLuc-Dura-SV40-N的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒).pdf

pGLuc-Dura-SV40-N中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGLuc-Dura-SV40-N)包括:

AatII AfeI AgeI AleI AscI AsiSI BaeI
BbvCI BclI BlpI BmgBI Bpu10I BsaAI BsiWI
BsmBI BspEI BspQI BsrGI BssHII BstBI BstEII
BstXI BstZ17I Bsu36I CspCI DraIII EcoNI Esp3I
FseI KasI NaeI NarI NdeI NgoMIV PacI
PciI PflFI PflMI PluTI PmeI PmlI PpuMI
PshAI RsrII SapI SbfI SfoI SgrAI SmaI
SnaBI SrfI SwaI TspMI Tth111I XcmI XmaI
ZraI

pGLuc-Dura-SV40-N中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGLuc-Dura-SV40-N)包括:

Acc65I G`GTAC,C 54 KpnI G,GTAC`C 54
AflIII A`CRYG,T 438 MfeI C`AATT,G 1471
ApaI G,GGCC`C 479 MluI A`CGCG,T 439
AseI AT`TA,AT 2312 MscI TGG|CCA 847
AvaI C`YCGR,G 426 NheI G`CTAG,C 744
AvrII C`CTAG,G 404 NotI GC`GGCC,GC 1319
BamHI G`GATC,C 1564 NruI TCG|CGA 859
BglII A`GATC,T 1 PaeR7I C`TCGA,G 426
BmtI G,CTAG`C 744 PsiI TTA|TAA 1442
BsaHI GR`CG,YC 1947 PspOMI G`GGCC,C 474
BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 746 PspXI VC`TCGA,GB 426
BsoBI C`YCGR,G 426 PstI C,TGCA`G 518
BspDI AT`CG,AT 1557 PvuII CAG|CTG 80
ClaI AT`CG,AT 1557 SacI G,AGCT`C 437
EagI C`GGCC,G 1319 SacII CC,GC`GG 883
EarI CTCTTCN`NNN, 1688 SexAI A`CCWGG,T 171
Eco53kI GAG|CTC 434 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 354
EcoO109I RG`GNC,CY 475 SpeI A`CTAG,T 469
EcoRI G`AATT,C 451 SspI AAT|ATT 1682
EcoRV GAT|ATC 459 StuI AGG|CCT 403
HaeII R,GCGC`Y 3131 XbaI T`CTAG,A 1312
HindIII A`AGCT,T 445 XhoI C`TCGA,G 427
HpaI GTT|AAC 1462

pGLuc-Dura-SV40-N质粒可使用的测序引物序列如下:

T7 Primer (726-744): TAATACGACTCACTATAGG

pGLuc-Dura-SV40-N的全序列信息:D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒).txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2764-1µg pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) 1μg
D2764-100µg pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) 100μg
说明书 1份
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pGLuc-Dura-SV40-N质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入感兴趣的5'-UTR、启动子、增强子等调控元件,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
4.pGLuc-Dura-SV40-N质粒或使用该质粒构建的新质粒转染细胞后,后续可以采用碧云天的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因检测试剂盒检测Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶的表达水平。
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