pCMV-N-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-HA质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 1–602 |
T3 promoter and T3 primer binding site | 620–639 |
HA tag | 679–705 |
multiple cloning site | 708–781 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 824–845 |
SV40 polyA signal | 857–1240 |
f1 origin of ss-DNA replication | 1378–1684 |
bla promoter | 1709–1833 |
SV40 promoter | 1853–2191 |
neomycin/kanamycin resistance ORF | 2226–3017 |
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3018–3476 |
pUC origin | 3605–4272 |
pCMV-N-HA质粒的图谱如下:
pCMV-N-HA质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2733 pCMV-N-HA.pdf 。
pCMV-N-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括:
Afl II | Age I | Ahd I | Asc I | Bbs I | Bbv II | Blp I |
Bsg I | BsiW I | BsmB I | BspM II | BsrG I | BssH II | Bst1107 I |
BstE II | Ear I | Eco47 III | Eco72 I | EcoN I | Esp I | Fse I |
Nru I | PflM I | Pme I | Pml I | PpuM I | Psp1406 I | Sap I |
Sca I | Spl I |
pCMV-N-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括:
Nde I | CA`TA,TG | 241 | Pvu I | CG,AT`CG | 858 | |
SnaB I | TAC|GTA | 347 | Bcl I | T`GATC,A | 1012 | |
Sac I | G,AGCT`C | 656 | Mun I | C`AATT,G | 1105 | |
Sac II | CC,GC`GG | 663 | Hpa I | GTT|AAC | 1118 | |
BstX I | CCAN,NNNN`NTGG | 664 | Mlu I | A`CGCG,T | 1241 | |
Not I | GC`GGCC,GC | 669 | Dra III | CAC,NNN`GTG | 1471 | |
PspA I | C`CCGG,G | 709 | Sfi I | GGCCN,NNN`NGGCC | 2130 | |
Xma I | C`CCGG,G | 709 | BseR I | GAGGAG 16/14 | 2173 | |
Srf I | GCCC|GGGC | 711 | Stu I | AGG|CCT | 2176 | |
Sma I | CCC|GGG | 711 | Cla I | AT`CG,AT | 2195 | |
BamH I | G`GATC,C | 716 | Kas I | G`GCGC,C | 2354 | |
Hind III | A`AGCT,T | 722 | Nar I | GG`CG,CC | 2355 | |
Pst I | C,TGCA`G | 732 | Ehe I | GGC|GCC | 2356 | |
EcoR I | G`AATT,C | 734 | Bbe I | G,GCGC`C | 2358 | |
EcoR V | GAT|ATC | 742 | Msc I | TGG|CCA | 2437 | |
Sal I | G`TCGA,C | 746 | Tth111 I | GACN`N,NGTC | 2473 | |
Acc I | GT`MK,AC | 747 | BsrD I | GCAATG, 8 | 2588 | |
Bgl II | A`GATC,T | 752 | Bsp1286 I | G,DGCH`C | 2658 | |
PaeR7 I | C`TCGA,G | 758 | Rsr II | CG`GWC,CG | 2871 | |
Xho I | C`TCGA,G | 758 | BsiC I | TT`CG,AA | 3037 | |
Xba I | T`CTAG,A | 764 | BstB I | TT`CG,AA | 3037 | |
Spe I | A`CTAG,T | 770 | Bsa I | GGTCTC 7/11 | 3344 | |
Bsp120 I | G`GGCC,C | 776 | HgiE II | ACCNNNNNNGGT-1/13 | 3684 | |
Apa I | G,GGCC`C | 780 | ApaL I | G`TGCA,C | 3959 |
pCMV-N-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer (620–639): 5′ AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer (824-845): 5′ GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-HA的全序列信息: D2733 pCMV-N-HA-seq.txt
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2733-1μg | pCMV-N-HA | 1μg |
D2733-100μg | pCMV-N-HA | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。